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铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

3.8k也不长，为什么要分段扩呢？要是想克隆PCR用高保真酶不是更好

21楼2016-12-28 15:28:31

铜虫 (小有名气)

重叠PCR，用过两步法，第二次PCR注意两个片段的模板浓度，都不要太高，同时两个模板浓度不要差异太大。循环是稍微低一点，减少突变。

22楼2016-12-28 20:44:22

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:

2楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-12-02 14:20:31
你们重叠区这么长181bp，一般你都是这么做的吗？我重叠部分一般都是25-30bp。我没有P过这么长的，181bp那你退火温度是多少啊？

其实楼主的意思是分两段之后这两段的overlap是181，这个不大的。比如100个片段，分1-50,49-100这样，想overlap大一点甚至可以47-100这样分，因为overlap越大越容易拼接嘛。

目标：生物的星辰大海！！！！

23楼2019-06-04 08:52:06

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