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浮笙若梦

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

3.8k也不长,为什么要分段扩呢?要是想克隆PCR用高保真酶不是更好
21楼2016-12-28 15:28:31
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yangxp2006

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

重叠PCR,用过两步法,第二次PCR注意两个片段的模板浓度,都不要太高,同时两个模板浓度不要差异太大。循环是稍微低一点,减少突变。
22楼2016-12-28 20:44:22
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眺望爱

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-12-02 14:20:31
你们重叠区这么长181bp,一般你都是这么做的吗?我重叠部分一般都是25-30bp。我没有P过这么长的,181bp那你退火温度是多少啊?

其实楼主的意思是分两段之后这两段的overlap是181,这个不大的。比如100个片段,分1-50,49-100这样,想overlap大一点甚至可以47-100这样分,因为overlap越大越容易拼接嘛。
目标:生物的星辰大海!!!!
23楼2019-06-04 08:52:06
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