24小时热门版块排行榜    

查看: 3511  |  回复: 22

sky蒲公英

版主 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主

设置梯度退火温度,看一下最适合的退火温度

发自小木虫Android客户端
知识就像蒲公英的花儿一样,播种在世界的每一个角落。
11楼2016-12-03 19:02:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xuzhangxm

新虫 (初入文坛)

太长了,引物特异性怎么样

发自小木虫Android客户端
在路上
12楼2016-12-03 19:30:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清嗓金声

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
2楼: Originally posted by 仇峰12306 at 2016-12-02 14:20:31
你们重叠区这么长181bp,一般你都是这么做的吗?我重叠部分一般都是25-30bp。我没有P过这么长的,181bp那你退火温度是多少啊?

只有一个基因得重叠区这么长,退火温度我按照端的引物,不是按照引物温度?得根据重叠区长度算退火温度?另外一个40多bp就重叠上了。

发自小木虫Android客户端
13楼2016-12-08 09:27:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清嗓金声

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
11楼: Originally posted by sky蒲公英 at 2016-12-03 19:02:47
设置梯度退火温度,看一下最适合的退火温度

现在属于降低温度提高温度都出不来条带的那种。真怀疑是不是重叠区过长

发自小木虫Android客户端
14楼2016-12-08 09:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1334451928

木虫 (小有名气)

减少循环数,30以内;缩短退火时间

发自小木虫Android客户端
neversaydie!
15楼2016-12-08 09:38:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清嗓金声

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
15楼: Originally posted by 1334451928 at 2016-12-08 09:38:58
减少循环数,30以内;缩短退火时间

如果两个片段的中间引物有单引物扩增怎么解决?单引物扩增的原因是什么?

发自小木虫Android客户端
16楼2016-12-08 09:56:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1334451928

木虫 (小有名气)

你是用三个引物做的overlap?

发自小木虫Android客户端
neversaydie!
17楼2016-12-08 10:45:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清嗓金声

铜虫 (初入文坛)


引用回帖:
17楼: Originally posted by 1334451928 at 2016-12-08 10:45:39
你是用三个引物做的overlap?

两个啊,最外端的两个。

发自小木虫Android客户端
18楼2016-12-08 23:33:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

试试两步法PCR,也可以试试提高2个片段的量,同时减少循环次数到10次看看。
为什么
19楼2016-12-09 00:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

p君少年

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以适当提高退火温度,还有调整片段加入比例
20楼2016-12-28 14:55:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 清嗓金声 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料专业求调剂 +11 hanamiko 2026-03-18 11/550 2026-03-23 23:12 by peike
[考研] 一志愿211 初试270分 求调剂 +4 谷雨上岸 2026-03-23 5/250 2026-03-23 21:18 by 不惑可乐
[考研] 303求调剂 +4 元夕元 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:00 by macy2011
[考研] 一志愿上海交大生物与医药专硕324分,求调剂 +5 jiajunX 2026-03-22 5/250 2026-03-23 18:07 by YMU施老师
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 307求调剂 +11 冷笙123 2026-03-17 11/550 2026-03-22 20:16 by edmund7
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 313求调剂 +4 肆叁贰壹22 2026-03-19 4/200 2026-03-21 17:33 by ColorlessPI
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 一志愿华中科技大学,080502,354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华南师大 070300(化学)304分求调剂 +3 0703武芊慧雪304 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:48 by JourneyLucky
[考研] 南京大学化学376求调剂 +3 hisfailed 2026-03-19 6/300 2026-03-20 23:43 by hisfailed
[考研] 295求调剂 +4 一志愿京区211 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:41 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南昌大学,327分,材料与化工085600 +9 Ncdx123456 2026-03-19 9/450 2026-03-20 23:41 by lovewei0727
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
信息提示
请填处理意见