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之前p的时候，特异性很好，条带也很亮，但是最近p一直p不出来，换了新一管同样的引物和cDNA也是p不出来，第一个图是之前p的，第二个图是最近p的，实验新手请大神赐教  发自小木虫Android客户端 |
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-12-04 22:28:02
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2016-12-04 22:28:02
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你的cDNA逆转出来多久啦？会不会引物和模板存在降解呢？我之前用的phanta max扩过cDNA，也是这样的，后来咨询了他们技术，从以下方面做了改进，然后就扩出了很好看的条带，你可以参考一下！ 原因 1. 引物特异性差 2. 引物或模板浓度太高 3. 酶或镁离子浓度偏高 4. 退火温度偏低 5. 循环次数太多 对策 1. 重新设计引物或使用巣式PCR 2. 适当降低引物和模板浓度 3. 适当降低酶量或镁离子浓度 4. 提高退火温度 5. 适当降低循环次数 |
2楼2016-12-01 09:30:37
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