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zhangxi008398

银虫 (小有名气)

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[交流] 求助:通用引物问题,谢谢!

我筛选了几株细菌,正在做16SrRNA鉴定,我就用细菌的通用引物:
正向引物:AGAGTTT GATCCTGGCTCAG
反向引物: AAGGAGGTGATCCAGCCGCA
PCR体系:基因组  2uL
            正向引物  2uL
            反向引物 2uL
         10*PCR  buffer(Mg2+) 5uL
         dNTP       2uL
         Taq酶    2uL
         ddH2O    36uL
但是PCR的产物跑胶条带不亮,测序公司说PCR产物条带弱不适合测序.请问是我引物有问题还是PCR体系有问题还是别的原因,谢谢!

[ Last edited by zhangxi008398 on 2008-12-5 at 08:59 ]

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1楼 2008-12-05 08:53:52

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zhangxi008398

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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红花: 1
帖子: 259
在线: 42.8小时
虫号: 549762
注册: 2008-04-21
性别: MM

PCR体系:基因组  2uL
            正向引物(20pmol/ul)  2uL Tm 60
            反向引物(20pmol/ul) 2uL  Tm 64
            10*PCR  buffer(15mM Mg2+) 5uL
         dNTP (2.5mM )    2uL
         Taq酶(5u/ul)    2uL
         ddH2O    36uL    35个循环, 94(30S)-60(30S)-72(1min20s)35个循环,72 (5min)       谢谢!!