应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助:通用引物问题,谢谢!
81/1返回列表
查看: 1424  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

zhangxi008398

银虫 (小有名气)

[交流] 求助:通用引物问题,谢谢!

我筛选了几株细菌,正在做16SrRNA鉴定,我就用细菌的通用引物:
正向引物:AGAGTTT GATCCTGGCTCAG
反向引物: AAGGAGGTGATCCAGCCGCA   
   PCR体系:基因组  2uL
               正向引物  2uL
               反向引物   2uL
             10*PCR  buffer(Mg2+)   5uL  
             dNTP        2uL
             Taq酶     2uL
             ddH2O      36uL                                 
但是PCR的产物跑胶条带不亮,测序公司说PCR产物条带弱不适合测序.请问是我引物有问题还是PCR体系有问题还是别的原因,谢谢!

[ Last edited by zhangxi008398 on 2008-12-5 at 08:59 ]
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-12-05 08:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbyu007

木虫 (正式写手)
总感觉你的体系有问题，减点别的或加点别的
赞一下 回复此楼
我是笨笨鱼~~~
2楼2008-12-05 09:13:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户
介绍体系的时候不要光给加的液体的体积，是不是也应该把浓度告诉大家啊，还有PCR的循环参数什么的？引物的Tm？
赞一下 回复此楼
金币是赌出来的
3楼2008-12-05 13:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxi008398

银虫 (小有名气)
PCR体系:基因组  2uL
               正向引物(20pmol/ul)  2uL   Tm 60
               反向引物(20pmol/ul)    2uL  Tm 64            
               10*PCR  buffer(15mM Mg2+)   5uL  
             dNTP (2.5mM )       2uL
             Taq酶(5u/ul)     2uL
             ddH2O      36uL       35个循环, 94(30S)-60(30S)-72(1min20s)35个循环,72 (5min)         谢谢!!
赞一下 回复此楼
4楼2008-12-05 14:51:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

eaglezheng

铁虫 (小有名气)
Taq酶太多了，两个单位足够了  引物20pm各用1uL就够了，dNTP量少了要翻一倍。体系可以自己慢慢摸索
赞一下 回复此楼
5楼2008-12-05 19:48:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxi008398

银虫 (小有名气)
谢谢！
回复此楼
6楼2008-12-06 11:19:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pph0259

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by eaglezheng at 2008-12-5 19:48:
Taq酶太多了，两个单位足够了  引物20pm各用1uL就够了，dNTP量少了要翻一倍。体系可以自己慢慢摸索

这位仁兄说得很对
赞一下 回复此楼
7楼2008-12-06 12:51:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxi008398

银虫 (小有名气)
谢谢楼上2位,按你们说的,真行!
赞一下 回复此楼
8楼2008-12-09 13:47:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhangxi008398 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 19/950 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 16/800 2026-11-05 17:25 by My20PsvIExYO
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 17:15 by My20PsvIExYO
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 7/350 2026-11-05 16:08 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 6/300 2026-11-05 15:46 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:36 by My20PsvIExYO
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 kvewwGtKktqB 2026-11-04 7/350 2026-11-05 15:35 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-05 15:24 by My20PsvIExYO
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:14 by My20PsvIExYO
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 9/450 2026-11-05 15:13 by My20PsvIExYO
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 8/400 2026-11-05 10:59 by PYZmcHr5kSaq
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-05 10:39 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭