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juansheng198

新虫 (初入文坛)

[求助] 二抗为何要是多抗而不是单抗? 已有1人参与

新人求教。
用CoIP测蛋白相护作用,依次是PL, coip control ,coip experimental,WCE control,WCE experimental
一抗用的是0.4 μg/ml anti-HA antibody (12CA5; Roche)

第一次做的时候二抗用的是个单抗,结果如图一,

然后老师说二抗应该用多抗,所以重新strip再做,第二次的时候二抗用的是多抗(抗兔)。

请问为何这种情况下不能用单抗呢?

另外我听说单抗特异性强,那为何第一张图用了单抗反而条带多呢?

谢谢

二抗为何要是多抗而不是单抗?
Co-IP 二抗为单抗.jpg


二抗为何要是多抗而不是单抗?-1
COIP 二抗为多抗 .jpg
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田生帅菜

新虫 (正式写手)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-29 11:41:10
这个用单抗还是多抗有什么关系呢?只要是能免疫识别你的HA标签就可以啊。如果是coip,那你应该用两个蛋白的一抗分别作用,或者混合作用,要不怎么检两个蛋白?

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-11-29 08:43:48
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juansheng198

新虫 (初入文坛)


xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-29 11:41:16
引用回帖:
2楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-29 08:43:48
这个用单抗还是多抗有什么关系呢?只要是能免疫识别你的HA标签就可以啊。如果是coip,那你应该用两个蛋白的一抗分别作用,或者混合作用,要不怎么检两个蛋白?

我也觉得二抗是单抗还是多抗无所谓啊。。。
嗯,因为只是实验课,所以只做了coip,老师说如果要再确认的话需要做一个reverse coip。
但是老师说实验室技术员提供了错误的二抗,本来应该是多抗,但是他提供成了单抗,所以要重新做。
我查了一下,一抗是抗鼠的,二抗是抗兔的,所以应该没啥问题啊,不知道为何老师说是错了,而从结果来看,换了多抗之后确实得到了想要的条带啊。
3楼2016-11-29 08:59:32
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by juansheng198 at 2016-11-29 08:59:32
我也觉得二抗是单抗还是多抗无所谓啊。。。
嗯,因为只是实验课,所以只做了coip,老师说如果要再确认的话需要做一个reverse coip。
但是老师说实验室技术员提供了错误的二抗,本来应该是多抗,但是他提供成了单 ...

那应该就是跟什么单抗多抗无关,而是抗什么搞错了。感觉你们老师和实验员也迷迷糊糊呢…

发自小木虫IOS客户端
4楼2016-11-29 11:20:45
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-01 22:24:08
juansheng198: 金币+20, 有帮助, 谢谢 2016-12-07 11:39:41
就mouse抗体而言,其抗体可能是IgG1、IgG2a、IgG2b,IgG3,多克隆二抗可以保证都适用,适用面广,而且单克隆抗体成本高也没必要。
5楼2016-12-01 16:23:09
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掌控恶魔

新虫 (小有名气)


你老师估计不是很懂抗体这块吧。
6楼2017-01-09 16:32:15
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