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juansheng198

新虫 (初入文坛)

[求助] 二抗为何要是多抗而不是单抗？ 已有1人参与

新人求教。
用CoIP测蛋白相护作用，依次是PL， coip control ，coip experimental，WCE control，WCE experimental
一抗用的是0.4 μg/ml anti-HA antibody (12CA5; Roche)

第一次做的时候二抗用的是个单抗，结果如图一，

然后老师说二抗应该用多抗，所以重新strip再做，第二次的时候二抗用的是多抗（抗兔）。

请问为何这种情况下不能用单抗呢？

另外我听说单抗特异性强，那为何第一张图用了单抗反而条带多呢？

谢谢

二抗为何要是多抗而不是单抗？
Co-IP 二抗为单抗.jpg


二抗为何要是多抗而不是单抗？-1
COIP 二抗为多抗 .jpg
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1楼 2016-11-29 06:44:32
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田生帅菜

新虫 (正式写手)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-29 11:41:10
这个用单抗还是多抗有什么关系呢？只要是能免疫识别你的HA标签就可以啊。如果是coip，那你应该用两个蛋白的一抗分别作用，或者混合作用，要不怎么检两个蛋白？

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2楼2016-11-29 08:43:48
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juansheng198

新虫 (初入文坛)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-29 11:41:16
引用回帖:
2楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-29 08:43:48
这个用单抗还是多抗有什么关系呢？只要是能免疫识别你的HA标签就可以啊。如果是coip，那你应该用两个蛋白的一抗分别作用，或者混合作用，要不怎么检两个蛋白？

我也觉得二抗是单抗还是多抗无所谓啊。。。
嗯，因为只是实验课，所以只做了coip，老师说如果要再确认的话需要做一个reverse coip。
但是老师说实验室技术员提供了错误的二抗，本来应该是多抗，但是他提供成了单抗，所以要重新做。
我查了一下，一抗是抗鼠的，二抗是抗兔的，所以应该没啥问题啊，不知道为何老师说是错了，而从结果来看，换了多抗之后确实得到了想要的条带啊。
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3楼2016-11-29 08:59:32
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田生帅菜

新虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by juansheng198 at 2016-11-29 08:59:32
我也觉得二抗是单抗还是多抗无所谓啊。。。
嗯，因为只是实验课，所以只做了coip，老师说如果要再确认的话需要做一个reverse coip。
但是老师说实验室技术员提供了错误的二抗，本来应该是多抗，但是他提供成了单 ...

那应该就是跟什么单抗多抗无关，而是抗什么搞错了。感觉你们老师和实验员也迷迷糊糊呢…

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4楼2016-11-29 11:20:45
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-01 22:24:08
juansheng198: 金币+20, ★有帮助, 谢谢 2016-12-07 11:39:41
就mouse抗体而言，其抗体可能是IgG1、IgG2a、IgG2b，IgG3，多克隆二抗可以保证都适用，适用面广，而且单克隆抗体成本高也没必要。
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5楼2016-12-01 16:23:09
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掌控恶魔

新虫 (小有名气)
你老师估计不是很懂抗体这块吧。
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6楼2017-01-09 16:32:15
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