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chj8558

新虫 (小有名气)

[求助] 求助!RT-PCR后电泳无条带,maker跑的很好,不知怎么回事? 已有1人参与

PCR新手,做了几次pcr都无条带,而maker跑的很好,不知怎么回事。体系50ul
引物各1ul, 酶0.5ul, 10xpcr buffer 5ul, 反转录模板5ul, dNTP MIX 2ul,加dH2O补足50ul.
Pcr反应
94℃ 5min
94℃ 30s
55℃ 30s
72℃ 1min
34个循环
72℃ 5min

两条引物Tm均为60℃

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MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)

用actin引物去P反转录模板试试看呢

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竹杖芒鞋轻胜马,谁怕,一蓑烟雨任平生;回首向来萧瑟处,归去,也无风雨也无晴
2楼2016-11-28 22:57:11
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ygdeying_11

铁虫 (小有名气)

设个阳性对照 就知道是模板问题还是引物问题还是酶的问题

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3楼2016-11-28 23:21:34
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cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得引物的问题可能性比较大。。。。个人意见,仅供参考
4楼2016-11-29 10:09:01
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黄菠萝小姐

新虫 (初入文坛)

这种情况太常见了,提高退火温度再做一次,没带,用已经做成功有带的做一次,如果依然没带,就是你试剂出了问题,有带,就是你引物有问题,

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5楼2016-11-29 14:00:26
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chj8558

新虫 (小有名气)

今天又p了一下,退火温度设了个梯度,终于有条带了:-D

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6楼2016-11-29 15:41:37
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彭江容

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ygdeying_11 at 2016-11-28 23:21:34
设个阳性对照 就知道是模板问题还是引物问题还是酶的问题

请问怎么做阳性对照?

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7楼2016-11-29 16:05:18
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渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by ygdeying_11 at 2016-11-29 02:21:34
设个阳性对照 就知道是模板问题还是引物问题还是酶的问题

请问咋做阳性对照?

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8楼2017-03-16 22:58:57
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