24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1827  |  回复: 7

chj8558

新虫 (小有名气)

[求助] 求助!RT-PCR后电泳无条带,maker跑的很好,不知怎么回事? 已有1人参与

PCR新手,做了几次pcr都无条带,而maker跑的很好,不知怎么回事。体系50ul
引物各1ul, 酶0.5ul, 10xpcr buffer 5ul, 反转录模板5ul, dNTP MIX 2ul,加dH2O补足50ul.
Pcr反应
94℃ 5min
94℃ 30s
55℃ 30s
72℃ 1min
34个循环
72℃ 5min

两条引物Tm均为60℃

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MAS_rice

至尊木虫 (著名写手)

用actin引物去P反转录模板试试看呢

发自小木虫Android客户端
竹杖芒鞋轻胜马,谁怕,一蓑烟雨任平生;回首向来萧瑟处,归去,也无风雨也无晴
2楼2016-11-28 22:57:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ygdeying_11

铁虫 (小有名气)

设个阳性对照 就知道是模板问题还是引物问题还是酶的问题

发自小木虫Android客户端
3楼2016-11-28 23:21:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cry_2013

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得引物的问题可能性比较大。。。。个人意见,仅供参考
4楼2016-11-29 10:09:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄菠萝小姐

新虫 (初入文坛)

这种情况太常见了,提高退火温度再做一次,没带,用已经做成功有带的做一次,如果依然没带,就是你试剂出了问题,有带,就是你引物有问题,

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-11-29 14:00:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chj8558

新虫 (小有名气)

今天又p了一下,退火温度设了个梯度,终于有条带了:-D

发自小木虫Android客户端
6楼2016-11-29 15:41:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

彭江容

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by ygdeying_11 at 2016-11-28 23:21:34
设个阳性对照 就知道是模板问题还是引物问题还是酶的问题

请问怎么做阳性对照?

发自小木虫Android客户端
7楼2016-11-29 16:05:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

渊博震天

版主 (职业作家)

Yeast Display

优秀版主优秀版主

引用回帖:
3楼: Originally posted by ygdeying_11 at 2016-11-29 02:21:34
设个阳性对照 就知道是模板问题还是引物问题还是酶的问题

请问咋做阳性对照?

发自小木虫Android客户端
8楼2017-03-16 22:58:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chj8558 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 318求调剂,计算材料方向 +7 吸喵有害笙命 2026-04-01 8/400 2026-04-01 23:54 by 义文wang
[考研] 289求调剂 +21 新时代材料 2026-03-27 23/1150 2026-04-01 22:42 by peike
[考研] 339求调剂,想调回江苏 +7 烤麦芽 2026-03-27 10/500 2026-04-01 21:35 by 495374996
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +7 哇呼哼呼哼 2026-03-26 7/350 2026-04-01 20:47 by cqupH
[考研] 求调剂0703 +5 周嘉尧 2026-03-31 8/400 2026-04-01 20:32 by ltltkkk
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +15 柳溪边 2026-03-26 16/800 2026-04-01 17:07 by 七度不信任
[考研] 求生物学调剂 +7 15172915737 2026-04-01 7/350 2026-04-01 15:27 by 闲人终南山
[考研] 一志愿北交材料工程总分358 +5 cs0106 2026-04-01 7/350 2026-04-01 11:45 by wangjy2002
[考研] 070300求调剂306分 +5 26要上岸 2026-03-27 5/250 2026-04-01 11:09 by oooqiao
[考研] 318求调剂 +8 七忆77 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:37 by Jaylen.
[考研] 考研材料工程351分调剂 +5 整个好的 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:36 by topgun2009
[考研] 求调剂:一志愿:南京大学 专业:0705 总分320 ,本科985,四六级已过 +3 lfy760306 2026-03-31 3/150 2026-04-01 01:57 by Creta
[考研] 考研调剂求助 +7 13287130938 2026-03-31 7/350 2026-03-31 16:39 by 690616278
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-29 6/300 2026-03-31 16:35 by hypershenger
[有机交流] 甲基亚磺磺酸钠和甲基磺酸酯反应机理 10+3 kaobao456 2026-03-29 4/200 2026-03-30 23:16 by nBu锂
[考研] 328求调剂 +8 嗯滴的基本都 2026-03-27 8/400 2026-03-30 17:20 by Wang200018
[考研] 279求调剂 +4 蝶舞轻绕 2026-03-29 4/200 2026-03-29 09:45 by laoshidan
[考研] 298求调剂 +4 种圣赐 2026-03-28 4/200 2026-03-29 08:42 by q1092522407
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
信息提示
请填处理意见