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humants金虫 (正式写手)
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[求助] 溶菌酶破碎大肠杆菌
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我打算做蛋白提取，以前单纯用超声效果不好，为了尽量保留活性，选择用溶菌酶见超声破碎的方法。 我按照分子克隆上的步骤： 1.菌体称重为0.4g，加PBS buffer 3ml （PH=8.05），充分混匀。 2.加现配的50mg/ml溶菌酶溶液240微升，至终浓度4mg/ml。冰水浴3小时。 3.超声400w，10s，10s，40次，结果目测还是乳白色，镜检很多菌体。 为什么破不开，搞不懂，我前几天做预实验的时候，还能变澄清？？？ 注：预实验的步骤与现在的一样，只是菌体重量是0.1g加PBS 3ml，再加溶菌酶至1mg/ml，超声400w，10s,10s, 20次。 麻烦大家能给以帮助，先谢谢了... 今天又做了一次，加完溶菌酶之后在4度中半小时，产生了乳白色絮状沉淀，还以为破碎好了呢，但是一超又变混了，1200rpm ，15min 离心之后沉淀发黄，和菌体差不多应该是没破开...？？？？ [ Last edited by humants on 2008-12-6 at 18:45 ] |
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