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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 经过BCA定量后，WB时内参依然不齐，而且异常诡异
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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煮啊煮小鱼

铁虫 (初入文坛)

[求助] 经过BCA定量后，WB时内参依然不齐，而且异常诡异 已有3人参与

小弟刚开始做WB实验 具体步骤如下

首先样品是前面师兄冻存在负八十里的，

分 正常组，模型组，给药组 三组动物组织

每次蛋白分装定量取20微克组织+200微升 RIPA+PMSF 剪刀尽量剪碎后超声，冰上15min后离心，紧接着BCA定量

分装时每管20微升的体系 蛋白量30~60微克，其余用LB和pbs补齐

所有操作都是尽可能的低温 离心管离心机提前预冷


下面是重点


所有的内参tubulin 全部都是 加药组深 模型组其次 正常组最浅

提了三次蛋白了 做了8块胶了 几乎都是一毛一样的趋势 就不发多张图了
经过BCA定量后，WB时内参依然不齐，而且异常诡异

虽然tubulin这么不齐 但是目的蛋白齐啊
本该是给药组最深的目的蛋白 在正常组tubulin非常浅的情况下 硬生生的和目的
蛋白一个水平了
经过BCA定量后，WB时内参依然不齐，而且异常诡异-1

另外一个目的蛋白正常组也没表现出和tubulin相似的 该有的少量
经过BCA定量后，WB时内参依然不齐，而且异常诡异-2


各位大神帮忙看看 小弟现在真是不知道怎么办了
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1楼 2016-11-22 10:08:21
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博古书生

金虫 (小有名气)
我简接怀疑操作问题，让你师妹或者其他人试试你的样本！

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10楼2018-03-09 12:37:59
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丑丑小地

新虫 (小有名气)
1是某一实验组全提取完，混匀后，分装2

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2楼2016-11-22 14:38:46
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丑丑小地

新虫 (小有名气)
2实在不行重新做标曲

发自小木虫Android客户端
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3楼2016-11-22 14:39:16
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liuye1990

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
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4楼2016-11-23 09:19:59
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