24小时热门版块排行榜    

查看: 9735  |  回复: 10

煮啊煮小鱼

铁虫 (初入文坛)

[求助] 经过BCA定量后,WB时内参依然不齐,而且异常诡异 已有3人参与

小弟刚开始做WB实验 具体步骤如下

首先样品是前面师兄冻存在负八十里的,

分 正常组,模型组,给药组 三组动物组织

每次蛋白分装定量取20微克组织+200微升 RIPA+PMSF 剪刀尽量剪碎后超声,冰上15min后离心,紧接着BCA定量

分装时每管20微升的体系 蛋白量30~60微克,其余用LB和pbs补齐

所有操作都是尽可能的低温 离心管离心机提前预冷


下面是重点


所有的内参tubulin 全部都是 加药组深 模型组其次 正常组最浅

提了三次蛋白了 做了8块胶了 几乎都是一毛一样的趋势 就不发多张图了
经过BCA定量后,WB时内参依然不齐,而且异常诡异

虽然tubulin这么不齐 但是目的蛋白齐啊
本该是给药组最深的目的蛋白 在正常组tubulin非常浅的情况下 硬生生的和目的
蛋白一个水平了
经过BCA定量后,WB时内参依然不齐,而且异常诡异-1

另外一个目的蛋白正常组也没表现出和tubulin相似的 该有的少量
经过BCA定量后,WB时内参依然不齐,而且异常诡异-2


各位大神帮忙看看 小弟现在真是不知道怎么办了
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

丑丑小地

新虫 (小有名气)

1是某一实验组全提取完,混匀后,分装2

发自小木虫Android客户端
2楼2016-11-22 14:38:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

煮啊煮小鱼

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 丑丑小地 at 2016-11-22 14:39:16
2实在不行重新做标曲

我师妹也用的这个标曲 她提的细胞蛋白就没什么问题
6楼2016-11-23 16:25:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

丑丑小地

新虫 (小有名气)

3楼2016-11-22 14:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liuye1990

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

4楼2016-11-23 09:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

star013

新虫 (知名作家)


我们可以提供wb技术服务哈

发自小木虫Android客户端
5楼2016-11-23 09:35:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

顾钱思厚

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我的目的条带很亮,但内参不是很亮。什么原因呢???

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2016-11-23 21:55:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

煮啊煮小鱼

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 顾钱思厚 at 2016-11-23 21:55:03
我的目的条带很亮,但内参不是很亮。什么原因呢???

内参曝光久一点吧 或者增加一抗浓度? 可能目的蛋白本身丰度就高吧 有看到说这种情况分两张膜做的 一个专门跑目的蛋白 一个增加浓度以后测内参
8楼2016-11-24 16:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhuzhu198807

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

BCA测定的是组织内总蛋白的量,但是由于组织内细胞类型比较复杂,所以所测定的某一特定蛋白的浓度并不准确,以所测浓度作为参考电泳,若结果内参不齐,可以根据各条带的灰度对上样量做适当调整,也就是调内参。若是细胞样品的话,BCA测定结果就比较准确了,跑出来基本上内参都是齐的。
9楼2016-12-07 10:01:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

博古书生

金虫 (小有名气)

我简接怀疑操作问题,让你师妹或者其他人试试你的样本!

发自小木虫Android客户端
10楼2018-03-09 12:37:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 煮啊煮小鱼 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 17:01 by Xc2FxHsHkBNc
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 4/200 2026-11-07 16:28 by Xc2FxHsHkBNc
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 5/250 2026-11-07 16:06 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 6/300 2026-11-07 15:44 by Xc2FxHsHkBNc
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”:确已离世,正核实举报内容 +3 yexuqing 2026-11-04 5/250 2026-11-07 13:22 by 苏东坡二世
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +10 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 17:18 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 7/350 2026-11-06 16:43 by 5sJFDKp2kwuI
[考博] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 14/700 2026-11-06 16:32 by 5sJFDKp2kwuI
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:23 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章,我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +8 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 13:47 by BkA9Bi5cMhkD
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 kvewwGtKktqB 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 kvewwGtKktqB 2026-11-04 16/800 2026-11-06 05:00 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:02 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:51 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:42 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
信息提示
请填处理意见