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去磷酸化 已有2人参与
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| 请问体外表达的蛋白质去磷酸化怎么做？实验室有CIP(小牛长碱性磷酸酶)，可以用这个吗？时间、温度、反应体系如何？ |
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2楼2016-11-17 10:00:18
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缘生来物: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2016-12-21 20:08:27
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可以用CIP，反应温度是37摄氏度，我一般处理时间是2小时左右，然后中间一直旋转孵育。注意，加蛋白酶抑制剂会比较好。 我用的buffer终浓度是100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM dithiothreitol, pH 7.9。 样品最好是IP下来或者纯化后的，体系用50微升应该没问题。 你可以再查一下这篇文献参考一下：Kornhauser, J. M., Cowan, C. W., Shaywitz, A. J., Dolmetsch, R. E., Griffith, E. C., Hu, L. S., Haddad, C., Xia, Z., and Greenberg, M. E. (2002) CREB transcriptional activity in neurons is regulated by multiple, calcium-specific phosphorylation events. Neuron 34, 221-233 |
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