| 查看: 4254 | 回复: 6 | |||
[求助]
去磷酸化 已有2人参与
|
| 请问体外表达的蛋白质去磷酸化怎么做？实验室有CIP(小牛长碱性磷酸酶)，可以用这个吗？时间、温度、反应体系如何？ |
回复此楼» 猜你喜欢
澳大利亚 Murdoch University 全奖博士招生（3个名额）地质化工冶金领域
已经有11人回复
-
有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验）
已经有5人回复
-
重要来源：本周末出结果
已经有10人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有11人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有6人回复
-
不应该看fileCode
已经有9人回复
-
Filecode 又变了，巨变
已经有4人回复
-
分享一下我之前已中青C的计划书的filecode
已经有5人回复
-
FileCode能看出啥？
已经有26人回复
-
关于Filecode分析方法
已经有11人回复
hc-material
专家顾问 (职业作家)
-
专家经验: +702 - BioEPI: 1
- 应助: 517 (博士)
- 金币: 467.7
- 散金: 18028
- 红花: 313
- 帖子: 3594
- 在线: 518.9小时
- 虫号: 4027804
- 注册: 2015-08-18
- 性别: GG
- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
2楼2016-11-17 10:00:18
lubuddy
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 13146.5
- 散金: 4200
- 红花: 5
- 帖子: 844
- 在线: 277.4小时
- 虫号: 669107
- 注册: 2008-12-06
- 专业: 神经生物学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
缘生来物: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2016-12-21 20:08:27
缘生来物: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2016-12-21 20:08:27
|
可以用CIP，反应温度是37摄氏度，我一般处理时间是2小时左右，然后中间一直旋转孵育。注意，加蛋白酶抑制剂会比较好。 我用的buffer终浓度是100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl2, 1 mM dithiothreitol, pH 7.9。 样品最好是IP下来或者纯化后的，体系用50微升应该没问题。 你可以再查一下这篇文献参考一下：Kornhauser, J. M., Cowan, C. W., Shaywitz, A. J., Dolmetsch, R. E., Griffith, E. C., Hu, L. S., Haddad, C., Xia, Z., and Greenberg, M. E. (2002) CREB transcriptional activity in neurons is regulated by multiple, calcium-specific phosphorylation events. Neuron 34, 221-233 |
3楼2016-11-24 20:20:32
4楼2016-12-21 21:46:30
lubuddy
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 13146.5
- 散金: 4200
- 红花: 5
- 帖子: 844
- 在线: 277.4小时
- 虫号: 669107
- 注册: 2008-12-06
- 专业: 神经生物学
5楼2016-12-23 15:45:03
蔡小蕾99
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 156.7
- 帖子: 132
- 在线: 24.9小时
- 虫号: 3569153
- 注册: 2014-12-01
- 性别: MM
- 专业: 生化分析及生物传感
6楼2017-07-20 16:43:35
7楼2018-08-31 16:47:53
