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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物扩增
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大包子小包子

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR产物扩增

在做PCR扩增实验时，有一条杂带，提高了退火温度杂带变多了是什么原因？

PCR产物扩增


PCR产物扩增-1


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1楼 2016-11-16 11:24:52
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

sky蒲公英

版主 (文坛精英)
★ ★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-12-15 07:40:13
退火温度不是越高越好，超过一定的温度，目的条带也会扩不出来的，建议做一个梯度PCR，1-2度为一个梯度，找到最适合的退火温度。

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11楼2016-12-15 00:26:37
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鱼》

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 鱼》 at 2016-11-17 07:08:59
温度高了，特异性差了吧

其实它是有一个温度范围的，太高太低都不好，大楷56到60°

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15楼2016-12-15 09:16:26
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datx

木虫 (小有名气)
★
大包子小包子(金币+1): 谢谢参与
?(????)

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7楼2016-11-17 06:31:56
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LIGELISA

铜虫 (初入文坛)
★
大包子小包子(金币+1): 谢谢参与
做个浓度梯度看看～

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8楼2016-11-17 07:07:38
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鱼》

新虫 (正式写手)
★
大包子小包子(金币+1): 谢谢参与
温度高了，特异性差了吧

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9楼2016-11-17 07:08:59
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LIGELISA

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by 鱼》 at 2016-11-17 07:08:59
温度高了，特异性差了吧

你好，温度高了不是特异性增强么？

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10楼2016-12-15 00:20:21
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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用touch downPCR试试

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12楼2016-12-15 07:08:44
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安静de执着14

新虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
退火温度太高，特异性条带会不清楚，你把循环次数减少到25个循环，应该就可以了。

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13楼2016-12-15 07:30:17
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wsywxs

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你退火温度是多少？是不是比较低？

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14楼2016-12-15 07:58:51
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Alice 2016

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
推荐用特异性强的高保真酶，我试过诺唯赞的phanta max 还不错，你可以试试。
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16楼2016-12-15 14:36:34
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peitaokong

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果是这样的话，应该是引物的特异性不好。其实你可以设置一下温度梯度进行扩增，一般温度越高，引物的特异性越好。但如果引物本身的特异性就差，就很有可能扩增出同源性较高的序列，这也很正常。
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17楼2016-12-15 14:58:37
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amber99

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
个人拙见：过高的温度，使得引物与模版的结合效率下降，容易形成引物二聚体。建议做梯度，阴性对照最好也做一个。

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18楼2016-12-15 19:23:21
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tzynew2楼
2016-11-17 00:32   回复  
大包子小包子(金币+1): 谢谢参与
瑞雯风3楼
2016-11-17 03:47   回复  
大包子小包子(金币+1): 谢谢参与
。
shinesun984楼
2016-11-17 05:54   回复  
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shenrenren5楼
2016-11-17 06:14   回复  
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youngen6楼
2016-11-17 06:28   回复  
大包子小包子(金币+1): 谢谢参与
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