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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于荧光定量pcr结果求教
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jodie_DoDo

新虫 (小有名气)

[求助] 关于荧光定量pcr结果求教 已有1人参与

求教各位大神，我最近在做RT-qPCR,用了两个样品，每个样品测6个基因（包括内参），其中内参基因Ct值在16左右，有两个目的基因Ct值为0，其余三个目的基因Ct值在30左右，想请教下Ct值为0是怎么回事呀，并且做了两次都一样结果。
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1楼 2016-11-13 17:52:40
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)
估计是 表达量太高，超过了检测限，所以你要先做一个标准曲线。像这种检测不到的肯定不能一起检测。通过标准曲线你就知道你的模板浓度在哪个范围合适

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2楼2016-11-13 23:28:49
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jodie_DoDo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by choujiaoqi at 2016-11-13 23:28:49
估计是 表达量太高，超过了检测限，所以你要先做一个标准曲线。像这种检测不到的肯定不能一起检测。通过标准曲线你就知道你的模板浓度在哪个范围合适

CT值太高或为0，也就是扩增曲线没有起飞，不应该是表达量太低或不表达吗？
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3楼2016-11-14 09:19:43
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)
ct值越高表达量越低，没起峰，那就可能是 表达量太低了。

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4楼2016-11-14 09:25:49
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)
当然有可能你的引物设计有问题

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5楼2016-11-14 09:26:08
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choujiaoqi

铁杆木虫 (知名作家)
有几个思路，先做完定量以后再跑个电泳。还一个做个标准曲线。标准曲线都是必须要做的，现在的学生好多偷懒的省了这一步。

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6楼2016-11-14 09:28:23
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jodie_DoDo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by choujiaoqi at 2016-11-14 09:28:23
有几个思路，先做完定量以后再跑个电泳。还一个做个标准曲线。标准曲线都是必须要做的，现在的学生好多偷懒的省了这一步。

嗯嗯，有可能是不表达，也可能是引物的问题。谢谢你哈
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7楼2016-11-14 10:29:50
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美亿美生物

捐助贵宾 (职业作家)

技术服务-实验代做

【答案】应助回帖

商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
感谢参与，应助指数 +1
我们提供定量技术援助，有需要的话，可以联系
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8楼2016-11-16 09:15:45
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