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克隆启动子 已有1人参与
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克隆一个基因的启动子，大小在2.5K，老是p不出来，用的高保真的酶，引物两端加了酶切位点，引物没加酶切位点时NCBI-blast，特异性很好，求大神、同行们帮助，，跪谢??? 发自小木虫Android客户端 |
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先设计一对不带酶切位点的引物，要尽可能覆盖启动子全长，下游可以结合在5`utr或cds上，上游尽可能靠前，测序正确后，再以此为模板，加酶切位点精确克隆。 发自小木虫Android客户端 |
Inmybloom4楼2016-11-07 23:59:45
田生帅菜
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我最近也在做类似实验。不过我的序列比较短，纯启动子100bp，算上前面的调控序列才260，但前面调控我是合成的，因为都是重复序列，无法PCR。建议你分段扩增，看看短一点能不能扩出来，再融合就可以了。 发自小木虫IOS客户端 |
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2楼2016-11-07 20:50:42
wangxiaoguo
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是没加位点是可以扩出来，加了位点的引物扩不出来？可以看一下引物的匹配性，提高温度，或者用两步法试试 发自小木虫Android客户端 |
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3楼2016-11-07 23:26:19
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