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克隆启动子 已有1人参与
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克隆一个基因的启动子，大小在2.5K，老是p不出来，用的高保真的酶，引物两端加了酶切位点，引物没加酶切位点时NCBI-blast，特异性很好，求大神、同行们帮助，，跪谢??? 发自小木虫Android客户端 |
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送红花一朵 
9楼2016-11-08 12:32:27
田生帅菜
新虫 (正式写手)
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- 性别: GG
- 专业: 病毒学
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我最近也在做类似实验。不过我的序列比较短，纯启动子100bp，算上前面的调控序列才260，但前面调控我是合成的，因为都是重复序列，无法PCR。建议你分段扩增，看看短一点能不能扩出来，再融合就可以了。 发自小木虫IOS客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
2楼2016-11-07 20:50:42
wangxiaoguo
木虫 (正式写手)
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- 注册: 2009-10-09
- 专业: 植物生理与生化
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是没加位点是可以扩出来，加了位点的引物扩不出来？可以看一下引物的匹配性，提高温度，或者用两步法试试 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2016-11-07 23:26:19
寒冰利剑
金虫 (小有名气)
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- 性别: GG
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
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先设计一对不带酶切位点的引物，要尽可能覆盖启动子全长，下游可以结合在5`utr或cds上，上游尽可能靠前，测序正确后，再以此为模板，加酶切位点精确克隆。 发自小木虫Android客户端 |
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4楼2016-11-07 23:59:45