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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 同源重组
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新人求帮助

新虫 (初入文坛)

[求助] 同源重组 已有2人参与

最近想用同源重组的方法做个构建，但是是第一次做，想问下关于引物的设计方法和载体线性化酶切位点的选择

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1楼 2016-11-06 16:35:13
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生态学新秀

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:23:47
xn8008: 应助指数+1 2016-11-06 21:23:52
下载相关文献，应该有引物设计的方法

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2楼2016-11-06 17:21:08
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:23:59
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1楼: Originally posted by 新人求帮助 at 2016-11-06 16:35:13
最近想用同源重组的方法做个构建，但是是第一次做，想问下关于引物的设计方法和载体线性化酶切位点的选择

你的这个问题非常简单。你去试剂公司的网站下载个说明书，写的特别清楚明了。我用的是vazyme的，挺好用。

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3楼2016-11-06 20:38:12
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新虫 (初入文坛)
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3楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-06 20:38:12
你的这个问题非常简单。你去试剂公司的网站下载个说明书，写的特别清楚明了。我用的是vazyme的，挺好用。
...

看了说明书，但是酶切位点具体选在哪一区域呢？说明书上只是写选择gc含量在40%-60%的区域

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4楼2016-11-07 14:40:43
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 新人求帮助 at 2016-11-07 14:40:43
看了说明书，但是酶切位点具体选在哪一区域呢？说明书上只是写选择gc含量在40%-60%的区域
...

在多克隆位点区域啊，选择两个离得远点儿的就行

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5楼2016-11-07 14:42:15
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新虫 (初入文坛)
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5楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-07 14:42:15
在多克隆位点区域啊，选择两个离得远点儿的就行
...

好的，谢谢！
那引物和载体同源部分有什么要求吗

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6楼2016-11-07 15:21:38
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by 新人求帮助 at 2016-11-07 15:21:38
好的，谢谢！
那引物和载体同源部分有什么要求吗
...

25个碱基的同源臂。我记得说明书上写的听清楚的哇，你再仔细看看

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7楼2016-11-07 18:16:28
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
不同方法设计的都或多或少的不太一样的
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···
8楼2016-11-08 08:43:19
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水晶蛋蛋

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
vazyme的试剂盒很好用
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9楼2016-11-08 11:11:29
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-07 18:16:28
25个碱基的同源臂。我记得说明书上写的听清楚的哇，你再仔细看看
...

可能是我表述不好，我想知道同源部分的gc含量是不是不能太高或太低，如果达不到要求呢？

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10楼2016-11-08 13:36:20
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