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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)
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求助啊 急 急 急！
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跑完pcr之后除了目标条带 多了一个杂带 而且目标条带也不是很亮 没办法做pcr产物回收 我有适当的提高退火温度 可是杂带更亮了 我也试过降低温度 可是还是有杂带 如果考虑胶回收 效率会很低 不知道要怎么做了？

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1楼 2016-11-03 17:01:31
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kaobo2012

木虫 (正式写手)
★ ★
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kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-05 16:56:57
可能是引物问题吧。你的模板是什么？如果是质粒，像snapgene这样的软件，引物有两个以上结合区域的话，是会有提示的。如果模板是基因组，可以NCBI里头blast下。
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12楼2016-11-03 19:24:01
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)
★
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-05 16:57:14
引用回帖:
12楼: Originally posted by kaobo2012 at 2016-11-03 19:24:01
可能是引物问题吧。你的模板是什么？如果是质粒，像snapgene这样的软件，引物有两个以上结合区域的话，是会有提示的。如果模板是基因组，可以NCBI里头blast下。

我blast过 没有匹配的

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13楼2016-11-03 21:51:48
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丽姐萍妹

新虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 丽姐萍妹 at 2016-11-03 21:51:48
我blast过 没有匹配的
...

而且我的引物没办法再改进了 有个问题没办法避免

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14楼2016-11-03 21:52:18
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rhapsody007

金虫 (小有名气)
★ ★
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kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-05 16:57:28
考虑从胶回收入手吧，引物无法改进，调整PCR体系或者条件，估计效率也不高
扩增的时候一个样本多扩几管，跑电泳时，把重复的几管点到一个点样孔里，然后胶回收
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15楼2016-11-04 11:33:13
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bluepanda42楼
2016-11-03 17:01   回复  
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月动奇迹3楼
2016-11-03 17:01   回复  
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￥海浪￥4楼
2016-11-03 17:01   回复  
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7677460355楼
2016-11-03 17:01   回复  
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奥莉奥6楼
2016-11-03 17:01   回复  
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zhuluying7楼
2016-11-03 17:01   回复  
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yunle09058楼
2016-11-03 17:01   回复  
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孤-岛9楼
2016-11-03 17:01   回复  
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青天览明月10楼
2016-11-03 17:01   回复  
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_ema1fang11楼
2016-11-03 17:01   回复  
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