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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 大肠杆菌BL21高密度发酵表达小分子蛋白表达量低
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gdm_1988

新虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌BL21高密度发酵表达小分子蛋白表达量低

各位虫友好:最近在做大肠杆菌高密度发酵表达小分子蛋白（蛋白大小6-7KD），表达蛋白为包涵体，表达量低，诱导前菌体生长较好，诱导6-9h后，湿重和ＯＤ不变，SDS-PAGE蛋白纯度下降，质粒稳定性也明显下降，蛋白纯度只有20%左右，但是摇瓶表达一般能达到40% ，不知道大家有没有遇到这种情况？还请高手指教
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1楼 2016-11-03 10:33:45
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以做表达纯化

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2楼2016-11-03 14:44:29
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田生帅菜

新虫 (正式写手)
给的建议是注意溶氧

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3楼2016-11-05 21:14:35
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gdm_1988

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-05 21:14:35
给的建议是注意溶氧

可是罐子一般会比摇瓶溶氧更好啊，我罐子控在30以上
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4楼2016-11-06 14:50:32
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gdm_1988

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 田生帅菜 at 2016-11-05 21:14:35
给的建议是注意溶氧

可是罐子一般会比摇瓶溶氧更好啊，我罐子控在30以上
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5楼2016-11-06 19:49:47
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田生帅菜

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gdm_1988 at 2016-11-06 19:49:47
可是罐子一般会比摇瓶溶氧更好啊，我罐子控在30以上...

我记得养酵母的时候需要溶氧比较高，细菌用那么高的溶氧吗？这个我不太清楚，你可以查一查文献。我们实验室之前做的也是，小瓶比罐稳定，罐子就是特别麻烦，需要摸索发酵条件，摸索好了条件就可以发一篇文章了。而且还要注意，你的罐子的传感器是否准确，有没有校准过。

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6楼2016-11-06 20:01:03
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
你的DO控制没有问题。营养分配:留一半营养到诱导后补料。诱导点设置:如果你的培养基能支持长到OD达到80，你就20左在开始诱导。诱导剂用量:诱导剂用量要适量高一些，比如高于0.5mM。

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7楼2016-11-06 20:30:52
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
玉米浆很适合BL21(DE3)发酵，而且有增强质粒稳定性的作用，你可以先用0.5%的玉米浆配个培养基试一下，注意灭菌前pH调到7以上。

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8楼2016-11-06 20:36:18
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gdm_1988

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by ganchao1776 at 2016-11-06 20:36:18
玉米浆很适合BL21(DE3)发酵，而且有增强质粒稳定性的作用，你可以先用0.5%的玉米浆配个培养基试一下，注意灭菌前pH调到7以上。

这个可以试一下，不过没有看到相关文献报道哦
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9楼2016-11-12 14:58:25
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