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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

[求助] 细胞复苏后生长慢已有3人参与

我从健康院借来的95-D细胞,复苏后一天长的很好,培养瓶差不多长满了,然后胰酶消化后就一瓶传了三瓶,结果到现在已经七天了,细胞长的很慢,每隔两天换液时发现里面漂浮着的死细胞好多,我该怎么办呀,求助网友。我用的1640百分之十FBS

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15541223321

木虫 (正式写手)

之前这个细胞是用什么培养基培养的

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2楼2016-11-02 19:38:49
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i19870503

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
培养条件,密度,污染,手法综合考虑吧

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2016-11-03 01:14:03
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aliaswork

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果排除楼上几位说的因素,我很怀疑是胰蛋白酶处理时间过长导致的。现在的补救措施只能勤换液了。祝实验顺利
4楼2016-11-04 15:14:49
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

内容已删除
5楼2016-11-04 20:45:53
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by aliaswork at 2016-11-04 15:14:49
如果排除楼上几位说的因素,我很怀疑是胰蛋白酶处理时间过长导致的。现在的补救措施只能勤换液了。祝实验顺利

多谢提醒,我的消化时间都是在显微镜下观察细胞形态来决定的,并且消化时间一般都是一分钟左右

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6楼2016-11-04 20:47:40
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lishuaiguang

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by i19870503 at 2016-11-03 01:14:03
培养条件,密度,污染,手法综合考虑吧

复苏后第二天就长的很好,所以我决定传代,但是传代后的这些细胞一般都长不满,百分之7/80左右就不会再汇合了,随着我接着换液,里面漂浮的细胞竟越来越多,现在已经提高血清浓度,看看情况吧(? .?.? ?)

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7楼2016-11-04 20:52:49
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i19870503

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by lishuaiguang at 2016-11-04 20:52:49
复苏后第二天就长的很好,所以我决定传代,但是传代后的这些细胞一般都长不满,百分之7/80左右就不会再汇合了,随着我接着换液,里面漂浮的细胞竟越来越多,现在已经提高血清浓度,看看情况吧(? .?.? ?)
...

一般细胞漂了基本就没戏了,还有的最好从新解冻,注意操作吧,我个人感觉kosr比血清生长快,如果之前是血清培养的可以和血清按1:1补充试试,重要实验就上商品培养基吧

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8楼2016-11-05 00:09:37
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田生帅菜

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

提高血清浓度到20%

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9楼2016-11-06 22:33:19
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梅雪芳

新虫 (小有名气)

如果所用的试剂品牌及培养瓶种类没变的话,可能就是消化的问题了,胰酶消化的时间受很多因素影响,比如胰酶的温度,细胞的贴壁状态,个人操作间隔时间等,每个人的操作习惯不同消化时间就有差。现在漂浮细胞多就一定要勤换液了,慢慢调整细胞状态,不要冒然换血清品牌

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10楼2016-11-06 23:37:28
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