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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 果蔬 » 求助求助求助!!!想从芒果cDNA文库中分离出“果胶甲酯酶抑制剂基因”!
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iiitsmegigi

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助求助求助!!!想从芒果cDNA文库中分离出“果胶甲酯酶抑制剂基因”! 已有1人参与

现在发现芒果中有果胶甲酯酶的活性，导师让我从分子生物学角度分离出这段基因，再进行体外表达，研究性质，请问应该用什么技术做啊？
诚心请教各位大牛！

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1楼 2016-11-02 10:28:54
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mayunhui

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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★ ★
感谢参与，应助指数 +1
iiitsmegigi(sytucom代发): 金币+2, 感谢应助，请继续关注楼主回复 2017-01-31 23:28:24
构建表达cDNA文库，再用功能筛选。
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iiitsmegigi
书到用时方恨少
2楼2016-11-03 11:47:14
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iiitsmegigi

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by mayunhui at 2016-11-03 11:47:14
构建表达cDNA文库，再用功能筛选。

能请教一下如何进行功能筛选吗？

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3楼2016-11-10 10:52:20
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mayunhui

新虫 (正式写手)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by iiitsmegigi at 2016-11-10 10:52:20
能请教一下如何进行功能筛选吗？
...

表达文库基因可以表达，那么含有果胶甲酯酶抑制剂基因的克隆就会表达这个这个蛋白，在根据这个蛋白所作用的产物设计相应实验进行筛选就好。教科书中常见的蓝白斑筛选就属于功能筛选。
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书到用时方恨少
4楼2016-11-14 10:42:53
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iiitsmegigi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by mayunhui at 2016-11-14 10:42:53
表达文库基因可以表达，那么含有果胶甲酯酶抑制剂基因的克隆就会表达这个这个蛋白，在根据这个蛋白所作用的产物设计相应实验进行筛选就好。教科书中常见的蓝白斑筛选就属于功能筛选。...

然后分离纯化出蛋白以后，再分析得到蛋白质氨基酸序列，然后再对应出基因序列吗？

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5楼2016-11-16 10:04:15
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mayunhui

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
5楼: Originally posted by iiitsmegigi at 2016-11-16 10:04:15
然后分离纯化出蛋白以后，再分析得到蛋白质氨基酸序列，然后再对应出基因序列吗？
...

不用分离蛋白啊，筛选到阳性克隆后，直接测序就好了。
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书到用时方恨少
6楼2016-11-16 10:27:18
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