应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » BAC重组质粒构建问题，电转后不长。
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 2366  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

火麒麟90

铁虫 (初入文坛)

[求助] BAC重组质粒构建问题，电转后不长。

各位大神，我现在在构建BAC基因文库，质粒（8000bp）连接目标片段（20-40kb）,利用T4连接酶将其在16℃连接20h，利用异丙醇和70%的乙醇洗涤两次后除盐，室温下干燥，利用20ul H2O溶解，通过电转导入到EPI300中，但是现在的问题为没有克隆子长出。请问各位大神有什么好的建议和解决方法。谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
只要自己去努力，没有做不到的事情！
1楼 2016-10-28 09:54:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

BAC 文库

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 雪之汐若 at 2016-11-30 11:17:51
想问一下你们BAC质粒一般在那里买？

BAC质粒是我们自己制备的！
赞一下 回复此楼
7楼2017-07-31 16:43:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

水-水

新虫 (初入文坛)
1）感受态细胞是自己制备的，还是购买的高转化效率的感受态细胞？
2）连接产物，是否载体与片段连接好了？
3）插入片段偏小。
赞一下 回复此楼
2楼2016-11-23 09:54:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

火麒麟90

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 水-水 at 2016-11-23 09:54:41
1）感受态细胞是自己制备的，还是购买的高转化效率的感受态细胞？
2）连接产物，是否载体与片段连接好了？
3）插入片段偏小。

感受态是自己做的，电转质粒还可以。片段和质粒连接没有检查过，不知道怎么查看！

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
只要自己去努力，没有做不到的事情！
3楼2016-11-23 16:14:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

火麒麟90

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 水-水 at 2016-11-23 09:54:41
1）感受态细胞是自己制备的，还是购买的高转化效率的感受态细胞？
2）连接产物，是否载体与片段连接好了？
3）插入片段偏小。

偏小就不行吗，连接不上吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
只要自己去努力，没有做不到的事情！
4楼2016-11-23 16:15:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程085601数二英一335求调剂 +4 双马尾痞老板2 2026-03-31 4/200 2026-03-31 18:11 by wxiongid
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +11 秋二十二 2026-03-30 11/550 2026-03-31 18:09 by 253863592
[考研] 290分调剂求助 +10 吉祥止止陈 2026-03-25 10/500 2026-03-31 17:54 by 544594351
[考研] 308求调剂 +11 墨墨漠 2026-03-25 11/550 2026-03-31 17:54 by 无际的草原
[考研] 考研生物与医药调剂 +6 铁憨憨123425 2026-03-31 6/300 2026-03-31 17:48 by 544594351
[考研] 江苏苏北高校诚邀调剂同学 +3 zzll406 2026-03-31 3/150 2026-03-31 16:54 by 及时行乐fan
[考研] 086000生物与医药 初试274求调剂 +4 小叮当来了 2026-03-30 4/200 2026-03-31 16:48 by shengliu165
[考研] 求调剂：085600材料与化工，考材科基，总分319 +16 678lucky 2026-03-31 19/950 2026-03-31 16:39 by hypershenger
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-31 4/200 2026-03-31 10:04 by cal0306
[考研] 一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕 +5 @taotao 2026-03-30 5/250 2026-03-31 09:41 by zhshch
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 8/400 2026-03-31 08:53 by Qshers
[考研] 考研调剂 +5 Sanmu-124 2026-03-26 5/250 2026-03-30 13:36 by chemdavid
[考研] 0703本科郑州大学求调剂 +7 nhj_ 2026-03-25 7/350 2026-03-30 12:44 by fangnagu
[考研] 348求调剂 +6 小懒虫不懒了 2026-03-28 6/300 2026-03-30 10:29 by Evan_Liu
[考研] 327求调剂 +6 汲亦昊 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:40 by peike
[考研] 356求调剂 +3 gysy?s?a 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:33 by 544594351
[考研] 数一英一271专硕（085401）求调剂，可跨 +7 前行必有光 2026-03-28 8/400 2026-03-28 23:22 by 小木虫tim
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +4 哇呼哼呼哼 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:02 by zhyzzh
[论文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 Russ_ss 2026-03-25 5/250 2026-03-27 10:49 by 陆小果画大饼
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭