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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 琼脂糖凝胶电泳总是丑，愁死个人，求助！
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Ivy尘

新虫 (正式写手)

[求助] 琼脂糖凝胶电泳总是丑，愁死个人，求助！ 已有8人参与

实验做得挺久的，可是琼脂糖凝胶电泳跑得一直很丑，最近胶回收总是出丑图，位置还不准，真是受不了了，来请教！

1.我是在loading buffer（50% 甘油，EDTA 1% 溴酚蓝，5 mM EDTA ）里加 1%Gel red ,上样时5微升Loading buffer+50毫升 PCR产物，点样孔几乎溢出。
2.BioRAD 电源、电泳槽（小），电压100V，跑半小时，溴酚蓝到胶块中间。

最近PCR产物胶回收的图，溴酚蓝带、目的条带都挤在一起了，位置根本不准，好生气。小孔点5微升位置正常。
琼脂糖凝胶电泳总是丑，愁死个人，求助！

从前正常一点的，酶切产物胶回收图，我觉得还好呢。
琼脂糖凝胶电泳总是丑，愁死个人，求助！-1

我自己的推测：
1. 上样量过大？loading buffer量不合适？
2.制胶不均匀？我都是沸腾两次才倒胶的。

求助~~
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1楼 2016-10-26 11:54:37
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jiangjinglin

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Ivy尘: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢~ 2016-10-28 20:22:14
胶没制好 看图应该没起泡 是不是跑的时候 电压没设置好
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我思故我在
31楼2016-10-28 09:39:06
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生物技术专业

铁虫 (小有名气)
加油

发自小木虫Android客户端
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3楼2016-10-26 14:39:33
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东东饭先森

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Ivy尘: 金币+5, ★★★很有帮助 2016-10-26 17:43:43
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-27 19:40:36
kuaile5420: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-10-27 20:44:58
以我多年跑图经验，应该就是制胶不均匀，溶胶时你在正常比例上多加10 ml TAE，然后溶2分钟，在旁边看着注意不要溢出。这样跑的图绝对美美哒
赞一下(4人) 回复此楼
年轻没有失败
4楼2016-10-26 15:26:48
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双鱼座的瓶盖

金虫 (小有名气)
感觉你的胶就没有做好，

发自小木虫IOS客户端
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5楼2016-10-26 15:38:48
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