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Ivy尘主管区长
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琼脂糖凝胶电泳总是丑，愁死个人，求助！ 已有8人参与
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实验做得挺久的，可是琼脂糖凝胶电泳跑得一直很丑，最近胶回收总是出丑图，位置还不准，真是受不了了，来请教！ 1.我是在loading buffer（50% 甘油，EDTA 1% 溴酚蓝，5 mM EDTA ）里加 1%Gel red ,上样时5微升Loading buffer+50毫升 PCR产物，点样孔几乎溢出。 2.BioRAD 电源、电泳槽（小），电压100V，跑半小时，溴酚蓝到胶块中间。 最近PCR产物胶回收的图，溴酚蓝带、目的条带都挤在一起了，位置根本不准，好生气。小孔点5微升位置正常。  从前正常一点的，酶切产物胶回收图，我觉得还好呢。  我自己的推测： 1. 上样量过大？loading buffer量不合适？ 2.制胶不均匀？我都是沸腾两次才倒胶的。 求助~~ |
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，应该就是制胶不均匀，溶胶时你在正常比例上多加10 ml TAE，然后溶2分钟，在旁边看着注意不要溢出。这样跑的图绝对美美哒 
4楼2016-10-26 15:26:48
论坛小虫虫
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你的胶有问题吧，你可以每次多配一些胶，然后放在60度左右的孵箱里面保存，这样就不用每次都配了，然后用的时候拿出来摇一摇再倒胶，然后加样不要太多，最好不要溢出来，跑胶时间也不用那么长，15min就差不多够了，注意调整好电压 发自小木虫Android客户端 |
29楼2016-10-27 23:43:54
shanyue00
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38楼2016-10-28 22:38:37
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稍微多放电解液，加热到澄清后加染料，赶掉气泡，点样不要太多，溢出去的话也会不好看的 发自小木虫IOS客户端 |
6楼2016-10-26 15:40:54
WilliamHJ
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10楼2016-10-26 17:46:52
小冀-
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12楼2016-10-27 08:52:58
zhangcarlm
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14楼2016-10-27 13:54:54
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把电泳液换成新的，降低上样量，这种孔一般30uL就可以了，如果想多上样可以换用切胶回收的大孔或用透明胶带把挨着的几个孔连起来，最后，胶要煮的澄清透亮似清水，时间可以根据胶的变化定，不一定1min， 发自小木虫Android客户端 |
15楼2016-10-27 14:49:11
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17楼2016-10-27 16:34:52
22楼2016-10-27 19:21:19
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23楼2016-10-27 21:17:58
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我们一般胶浓度0.8%-1%,biowest 0.32-0.4g,40ml 1×TAE ,微波炉加热，中火，2分钟，也就沸腾了，放到60度吧，加染料，混匀后，就直接制胶了，一般不会很厚，我习惯放那半小时以后，再去跑胶。加样是6微升loading buffer ，4微升样，122V,13-16分钟，跑出来的胶效果很好。以上给你做下参考。 发自小木虫IOS客户端 |
25楼2016-10-27 21:47:24
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32楼2016-10-28 11:28:30
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