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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 对PCR产物测序需要怎么准备样品？请大家教教经验，谢谢
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luckydog52

木虫 (著名写手)

[交流] 对PCR产物测序需要怎么准备样品？请大家教教经验，谢谢

我做完PCR扩出了目的片段，大小也合适。想对这个测一下序列。
据说好像是要插入到质粒里，把质粒一起拿去测序。

请问应该怎么做？

插入质粒之后，都应该给测序公司提供些什么？

为什么要插入到质粒里？

非常感谢！！！

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-2 at 12:12 ]
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自信源于一次次成功的积累
1楼 2008-11-28 12:01:34
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shining-rose

金虫 (小有名气)
★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:09
把目的片段连接到T载体上，然后转化到感受态细胞中培养，鉴定阳性菌落，培养转化好菌落，将提取质粒再做一下鉴定（酶切或PCR）。把阳性的质粒或菌液寄给测序公司就ok了。

有什么不足请楼下多多指点。
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2楼2008-11-28 14:41:12
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zhyyk10

金虫 (小有名气)
一般PCR产物在48h之后就降解了，为了安全起见，都是要导入质粒中，送阳性克隆或菌液的
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相信自己！
3楼2008-12-02 10:56:55
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lijx83

金虫 (小有名气)
我们实验室就是直接送pcr产物去测序，没问题的
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4楼2008-12-02 19:59:34
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luckydog52

木虫 (著名写手)
谢谢各位！！！
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自信源于一次次成功的积累
5楼2008-12-03 11:15:48
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hiking8715

金虫 (小有名气)
给你要用的公司打个电话就可以了，上海生工的不错啊
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6楼2008-12-03 20:56:39
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Liz1069

捐助贵宾 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:08
150bp以下的，克隆后再测序比较好
大一些的，直接拿PCR产物去侧序效果还不错
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7楼2008-12-04 09:52:10
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tiechui_0508

铁虫 (初入文坛)
直接可以测序，不过克隆到T载体测序更好！INVITROGEN比较好了
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8楼2008-12-04 11:00:00
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)
提供载体名称，要想测得准，直接送PCR产物，要想测的全，TA克隆
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帮助虫友，提升自己
9楼2008-12-05 04:35:40
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