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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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luckydog52

木虫 (著名写手)

[交流] 对PCR产物测序需要怎么准备样品?请大家教教经验,谢谢

我做完PCR扩出了目的片段,大小也合适。想对这个测一下序列。
据说好像是要插入到质粒里,把质粒一起拿去测序。

请问应该怎么做?

插入质粒之后,都应该给测序公司提供些什么?

为什么要插入到质粒里?

非常感谢!!!

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-2 at 12:12 ]
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自信源于一次次成功的积累
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shining-rose

金虫 (小有名气)

★ ★
司马诸葛(金币+2,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:09
把目的片段连接到T载体上,然后转化到感受态细胞中培养,鉴定阳性菌落,培养转化好菌落,将提取质粒再做一下鉴定(酶切或PCR)。把阳性的质粒或菌液寄给测序公司就ok了。

有什么不足请楼下多多指点。
2楼2008-11-28 14:41:12
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zhyyk10

金虫 (小有名气)

一般PCR产物在48h之后就降解了,为了安全起见,都是要导入质粒中,送阳性克隆或菌液的
相信自己!
3楼2008-12-02 10:56:55
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lijx83

金虫 (小有名气)

我们实验室就是直接送pcr产物去测序,没问题的
4楼2008-12-02 19:59:34
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luckydog52

木虫 (著名写手)

谢谢各位!!!
自信源于一次次成功的积累
5楼2008-12-03 11:15:48
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hiking8715

金虫 (小有名气)

给你要用的公司打个电话就可以了,上海生工的不错啊
6楼2008-12-03 20:56:39
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Liz1069

捐助贵宾 (小有名气)


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-17 10:08
150bp以下的,克隆后再测序比较好
大一些的,直接拿PCR产物去侧序效果还不错
7楼2008-12-04 09:52:10
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tiechui_0508

铁虫 (初入文坛)

直接可以测序,不过克隆到T载体测序更好!INVITROGEN比较好了
8楼2008-12-04 11:00:00
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charon1982

铁杆木虫 (著名写手)

提供载体名称,要想测得准,直接送PCR产物,要想测的全,TA克隆
帮助虫友,提升自己
9楼2008-12-05 04:35:40
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