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足下客木虫 (正式写手)
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[交流]
请教有关于双酶切后连接反应的有关问题
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我现在要将一个2.8kb的PCR产物片段连接到一个约7kb大的质粒上（此质粒为自己构建的，是连接了4.3Kb基因的PMD19 T vector) 选用的酶切位点是salI和PstI，宝生物的酶，10*Tango buffer ,连接温度为14度，时间大约为12个小时。 可是我连接了两次都没有成功，不知道问题出在哪儿。希望虫友们指点一下，非常感谢！ |
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