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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切的目的基因与质粒连接无阳性菌怎么解决？
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鸢尾很辣

木虫 (正式写手)

[求助] 双酶切的目的基因与质粒连接无阳性菌怎么解决？ 已有4人参与

本人目的片段1200bp左右，PCR后胶回收产物&载体用Kpn I和Xba I双酶切37℃过夜，目的片段：载体比例10:1，16℃连接过夜，转化后一直没有长出阳性菌，请大家帮帮忙，看我哪里出现了问题。
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1楼 2016-10-20 19:37:37
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
你是用的什么方法检测的呢？xbaI有可能甲基化导致酶切切不开   介意用pcr检测

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38楼2016-10-23 21:45:01
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lemonvivi

新虫 (小有名气)
是不是都没有连接闪上，能把你链接加的具体东西说一下吗

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2楼2016-10-20 20:47:07
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lemonvivi

新虫 (小有名气)
片段与载体比例要以摩尔比而不是体积比哈

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3楼2016-10-20 20:48:11
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鸢尾很辣

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lemonvivi at 2016-10-20 20:48:11
片段与载体比例要以摩尔比而不是体积比哈

是浓度比的意思吗？我是否应该去测一个浓度，什么摩尔比比较恰当。
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4楼2016-10-20 21:30:35
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