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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请问：如何进行双基因共表达？
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caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 请问：如何进行双基因共表达？

目前已经在一个表达载体克隆了一个基因，并实现了表达，想再放进去一个基因，并实现共表达。

现在我手头的载体就有一个mcs，如果把两个基因都放在这个mcs，那么我后面那段基因是不是要重新加一个启动子？

如果用同一个启动子的话，那么前面那个基因是否要去掉终止子？后面的基因ATG前是否必须加一个rbs序列？
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1楼 2008-11-26 17:08:55
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
分别克隆然后混起来转染不行？
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2楼2008-11-26 17:20:18
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
要不然这样，可以参考promega的psiCHECK这个载体
上面有两个荧光素酶基因共表达
看看人家怎么做的~~
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3楼2008-11-26 17:21:41
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veronica5129

铜虫 (初入文坛)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-15 11:01
一般来说可以实现融合表达，即一个启动子驱动2个基因实现单顺反子表达，要求：第一个基因去掉stop codon ,then make sure the second gene is in-frame with the first one.
    试问一下你所指的rbs序列具体指的哪个元件？实验材料是？
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性格决定命运
4楼2008-11-26 17:59:21
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wangjiasi

木虫 (正式写手)
两种蛋白构建到同种载体，或构建到两种有兼容性的载体上，然后两个蛋白的载体共转染
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5楼2008-11-26 18:11:01
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caiqingchong

木虫 (著名写手)
我要的不是两个蛋白的融合表达，而是表达成两个有活性的蛋白，是原核基因在原核细菌中表达。而且我我要的是在同一个载体上表达。
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6楼2008-11-26 19:16:06
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)


请看这个，两个荧光素酶基因一起表达
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7楼2008-11-26 20:01:35
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wolfebst

至尊木虫 (职业作家)
我把两个基因在一起表达过
但是这两个基因是在一个基因簇上相邻的基因,而且这两个基因之间有一定的间隔序列
没做任何处理,直接一个pcr反应将这两个基因一起扩增和克隆到pET28a载体上
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8楼2008-11-26 23:29:58
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