24小时热门版块排行榜    

查看: 881  |  回复: 7
当前主题已经存档。

caiqingchong

木虫 (著名写手)

[交流] 请问:如何进行双基因共表达?

目前已经在一个表达载体克隆了一个基因,并实现了表达,想再放进去一个基因,并实现共表达。

现在我手头的载体就有一个mcs,如果把两个基因都放在这个mcs,那么我后面那段基因是不是要重新加一个启动子?

如果用同一个启动子的话,那么前面那个基因是否要去掉终止子?后面的基因ATG前是否必须加一个rbs序列?
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

分别克隆然后混起来转染不行?
2楼2008-11-26 17:20:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

要不然这样,可以参考promega的psiCHECK这个载体
上面有两个荧光素酶基因共表达
看看人家怎么做的~~
3楼2008-11-26 17:21:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

veronica5129

铜虫 (初入文坛)


司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-15 11:01
一般来说可以实现融合表达,即一个启动子驱动2个基因实现单顺反子表达,要求:第一个基因去掉stop codon ,then make sure the second gene is in-frame with the first one.
    试问一下你所指的rbs序列具体指的哪个元件?实验材料是?
性格决定命运
4楼2008-11-26 17:59:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangjiasi

木虫 (正式写手)

两种蛋白构建到同种载体,或构建到两种有兼容性的载体上,然后两个蛋白的载体共转染
5楼2008-11-26 18:11:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caiqingchong

木虫 (著名写手)

我要的不是两个蛋白的融合表达,而是表达成两个有活性的蛋白,是原核基因在原核细菌中表达。而且我我要的是在同一个载体上表达。
6楼2008-11-26 19:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)



请看这个,两个荧光素酶基因一起表达
7楼2008-11-26 20:01:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wolfebst

至尊木虫 (职业作家)

我把两个基因在一起表达过
但是这两个基因是在一个基因簇上相邻的基因,而且这两个基因之间有一定的间隔序列
没做任何处理,直接一个pcr反应将这两个基因一起扩增和克隆到pET28a载体上
8楼2008-11-26 23:29:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员962cQt 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 287求调剂 +5 land xuxu 2026-03-26 5/250 2026-03-26 21:53 by baoball
[考研] 08工学调剂 +13 用户573181 2026-03-20 20/1000 2026-03-26 21:22 by 用户573181
[考研] 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-03-21 4/200 2026-03-26 20:38 by fmesaito
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 20:33 by cy128
[考研] 生物学学硕,一志愿湖南大学,初试成绩338 +4 YYYYYNNNNN 2026-03-26 4/200 2026-03-26 19:00 by macy2011
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +9 holy J 2026-03-21 9/450 2026-03-26 15:47 by 161765490
[考研] 一志愿陕师大生物学071000,298分,求调剂 +4 SYA! 2026-03-23 4/200 2026-03-26 15:27 by caiaijun80
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +5 kongweilin 2026-03-26 7/350 2026-03-26 14:37 by mapenggao
[考研] 寻找调剂 +5 倔强芒? 2026-03-21 8/400 2026-03-26 13:25 by 0906ljy
[考研] 一志愿南航 335分 | 0856材料化工 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 求调剂 +5 林之夕 2026-03-24 5/250 2026-03-24 17:16 by dick_runner
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
信息提示
请填处理意见