| 查看: 1563 | 回复: 4 | |||
[交流]
小鼠肝细胞原代培养实验 已有3人参与
|
|
实验方法原理 将小鼠的肝细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 实验材料 小鼠 试剂、试剂盒 DMEM无血清DMEM培养基胰酶PBS 仪器、耗材 饭盒纱布剪子镊子烧杯平皿研磨玻片滤网离心管6孔培养板吸管移液管手套微量加样器 实验步骤 一、实验材料准备 1. 动物：小鼠。 2. 试剂：DMEM(含血清)、无血清DMEM培养基、胰酶、PBS。 3. 器械：饭盒、纱布、小剪子、小镊子、大镊子、大烧杯、平皿、研磨玻片、滤网、离心管(15/50 ml)、6孔培养板、吸管、移液管、手套、微量加样器。 4. 准备：酒精擦拭台面后把物品摆放好，开紫外线灯照30分钟后开鼓风机吹至实验结束。 二、方法 1. 将小鼠断颈致死，置75%酒精泡2-3秒钟，取肝脏，置于盛有PBS的平皿中。 2. 剔除脂肪、结缔组织、血液等杂物，转移到另一个盛有PBS液的平皿中。 2.3 用手术剪将脏器剪成小块(大小约1mm2)，玻片研磨，转到离心管，离心(1 000 rpm，5 min)。 4. 视组织或细胞量加入5-6倍(3-5 ml)胰酶，37℃中消化20分钟，每隔5分钟振荡一次，或用吸管吹打一次，使细胞分离。 5. 加入3-5 ml含血清的培养液以中止胰酶消化作用。 6. 用100目孔径滤网滤过，除去未消化的大组织块。 7. 再次离心5 min，弃上清液。 8. 加入无血清培养液5 ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。 9. 加入含血清的培养液1-2 ml(视细胞量)，血球计数板计数。 10. 将细胞调整到5×105/ml左右，转移至6孔培养板中，37℃下培养 |
回复此楼» 猜你喜欢
296求调剂
已经有7人回复
-
302求调剂
已经有4人回复
-
086000生物与医药292求调剂
已经有5人回复
-
北科281学硕材料求调剂
已经有14人回复
-
材料与化工 322求调剂
已经有5人回复
-
333求调剂
已经有11人回复
-
材料专硕 335 分求调剂
已经有3人回复
-
07化学303求调剂
已经有3人回复
-
289求调剂
已经有11人回复
-
网络空间安全0839招调剂
已经有5人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 血清替代品：XerumFreeTM XF205 培养基添加物使用说明书
已经有2人回复
- 原代肝细胞不贴壁
已经有11人回复
- 各位有没有培养小鼠肝细胞的啊，小弟有问题求解
已经有2人回复
- 【求助】小鼠肝细胞检测ROS（DCF探针）阳性对照无荧光
已经有2人回复
- Nature：全览细胞培养技术最新前沿
已经有20人回复
- 动物试验知识
已经有3人回复
- 多种细胞的培养方法
已经有53人回复
- 分离原代肝细胞和原代脂肪细胞的得到的杂细胞如何去除？
已经有1人回复
- 【课件】毒理学
已经有57人回复
- 科技部公示973及重大科学研究计划立项项目
已经有11人回复
2楼2016-12-28 16:29:14
3楼2016-12-28 20:41:53
4楼2017-03-30 10:28:08
5楼2017-12-08 18:48:52
5