应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 基因敲除后的互补实验
31/1返回列表
查看: 2924  |  回复: 2
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

董红红

铜虫 (小有名气)

[求助] 基因敲除后的互补实验

实验室师兄已经利用同源重组的方式通过PEG介导的原生质体转化方法成功将一个基因敲掉了，并且通过了PCR及southern验证是正确，现在我需要接着做互补，我看文献正在构建了互补载体，但我对后面的实验有所困惑，我要是互补载体构建好了，然后我用敲掉的基因的转化子做原生质体，之后我是直接把互补载体导入原生质体吗？还是要将互补载体酶切或者什么的？原理是什么呢？希望懂得的大神帮我解答一下，不胜感激

发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-10-04 21:10:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longevens

新虫 (初入文坛)
您好，请问楼楼，我最近也在做原生质体，我的原因是在原生质体离心这一方面，8000转离心3分钟，直接倾倒，然后镜检酶解上清液，发现上清液还是有很多的原生质体。然后再次用0.7NaCl清洗离心，倾倒上清液，然后再镜检就只有一点点原生质体了根本不够做转化，楼楼请问你是怎么处理上清液的呢？我现在都不敢倒了。还有你每次是做多少体系的呢？我是做的10ml得酶解体系；还有为什么我在用STC悬浮的时候溶液会变成乳白色呢（STC溶液是澄清的，配方跟大众一样）？离心完了就成了白色粘稠沉淀，镜检完全看不到原生质体了，感觉被裹住了。非常希望您的帮助。
赞一下 回复此楼
Bequiet
2楼2017-08-10 17:06:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rabbit12510

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by longevens at 2017-08-10 17:06:28
您好，请问楼楼，我最近也在做原生质体，我的原因是在原生质体离心这一方面，8000转离心3分钟，直接倾倒，然后镜检酶解上清液，发现上清液还是有很多的原生质体。然后再次用0.7NaCl清洗离心，倾倒上清液，然后再镜检 ...

请问你的问题最后是怎么解决的呀？我现在也出现这种情况，离心后原生质体特别少，加入STC悬浮后，溶液变成乳白色。镜检发现有很多破碎的菌丝体
赞一下 回复此楼
3楼2018-11-25 09:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 董红红 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +4 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 4/200 2026-03-24 07:32 by wangy0907
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 材料专硕找调剂 +3 哈哈哈吼吼吼哈 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:13 by peike
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +5 niko- 2026-03-22 5/250 2026-03-23 22:01 by fuyu_
[考研] 298求调剂 +8 上岸6666@ 2026-03-20 8/400 2026-03-23 11:02 by laoshidan
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 初试 317 +7 半拉月丙 2026-03-20 7/350 2026-03-21 22:26 by peike
[考研] 299求调剂 +5 shxchem 2026-03-20 7/350 2026-03-21 17:09 by ColorlessPI
[考研] 南昌大学材料专硕311分求调剂 +6 77chaselx 2026-03-20 6/300 2026-03-21 07:24 by JourneyLucky
[考研] 083200学硕321分一志愿暨南大学求调剂 +3 innocenceF 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:35 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 308求调剂 +3 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 3/150 2026-03-20 23:24 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 085600材料与化工调剂 324分 +10 llllkkkhh 2026-03-18 12/600 2026-03-19 14:33 by llllkkkhh
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭