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阴离子交换层析纯化蛋白，目标酶吸附无规律，求解 已有2人参与
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纯化一酶，分子量和等电点未知，只能靠检测酶活来试验收集，过的是GE的DEAE-FF预装柱，平衡缓冲液用的0.01M ,pH7.4的PB缓冲液，洗脱用相同的加1M Nacl的PB，梯度洗脱，峰型如下图，结果在各个部分都检测到酶活，但大多数酶活都集中在进样时的穿透峰里，搞不明白为什么，而且经电泳检验越往后纯度是越好的，但酶活是下降的，纯化倍数下降更多，回收率更别提了，求大神帮忙解释一下怎么回事？已经试过用阳离子交换柱是不挂柱的～ @hc-material 发自小木虫Android客户端 |
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yanglin126
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7楼2016-10-07 20:13:13
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我现在才100mg蛋白左右，以前上样量更少筛选条件，后面洗脱根本检测不到，这加大上样量才能在后面洗脱峰检测到酶活，而且样品都是经过超滤置换缓冲液的，检测过pH。所以我现在有点搞不明白为什么了…… 发自小木虫Android客户端 |
8楼2016-10-07 22:06:27
9楼2016-10-08 15:54:14
yanglin126
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