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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

平衡缓冲液,及上样的ph,电导要一致,另外降低上样速度,上样量试试,祝顺利。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

11楼2016-10-09 14:16:08
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ljgangxs at 2016-10-08 15:54:14
看流穿量也不高,检测的酶活性高,是不是杂质组分对测活方法有干扰?造成假阳性

发酵液确实含有色素和多糖类物质,前处理已经除掉一部分了,实在没办法再除掉了,我也觉得有可能是这些杂质影响,但没办法确定

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12楼2016-10-10 19:41:36
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by yanglin126 at 2016-10-08 16:06:56
试一试9.5
...

这么高应该用什么缓冲液?

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13楼2016-10-10 19:42:30
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by hc-material at 2016-10-09 14:16:08
平衡缓冲液,及上样的ph,电导要一致,另外降低上样速度,上样量试试,祝顺利。

上样之前都是用超滤杯置换过缓冲液三遍,测定ph之后才上的样,而且上样量才19mg蛋白,再低就回收不了多少目标酶蛋白了~

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14楼2016-10-10 19:45:31
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stantontang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 学习有助成功 at 2016-10-03 10:30:36
放假都没人看吗

你这梯度洗脱用什么检测器的?
15楼2016-10-11 10:46:51
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by stantontang at 2016-10-11 10:46:51
你这梯度洗脱用什么检测器的?...

用的AKTA Pure仪器,只有一个UV280检测器,你说的梯度洗脱检测器什么意思?这有个混合池,系统自动抽液混和的

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16楼2016-10-12 12:02:31
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pickerwang

新虫 (初入文坛)

我们用同样的柱子分碱性磷酸酶也这样,穿透峰和梯度洗脱得好几处都有酶活。后来先上凝胶柱,再上DEAE,两次层析都只有一处能检测到酶活了。

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17楼2016-10-28 20:52:32
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pickerwang

新虫 (初入文坛)

原因不知道,但现象是如此,可能是成分太复杂,蛋白质间有吸附吧

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18楼2016-10-28 20:56:43
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by pickerwang at 2016-10-28 20:52:32
我们用同样的柱子分碱性磷酸酶也这样,穿透峰和梯度洗脱得好几处都有酶活。后来先上凝胶柱,再上DEAE,两次层析都只有一处能检测到酶活了。

那纯化效果怎么样?我样品直接上凝胶柱只出来一个峰,很奇怪啊

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19楼2016-10-29 16:08:25
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


首先纠正一下你的认识。蛋白质所带的电性跟你的缓冲液也就是平衡液的pH有绝对的关系。当pH=pI,你的蛋白在溶液中呈电中性,净电荷为0,阴阳离子交换介质都不吸附的。当pH>pI,你的蛋白呈负电荷,DEAE,Q阴离子交换介质才有用。pH<pI你的蛋白呈正电荷,阳离子交换介质CM,SP才有用。因为你的目标蛋白pI未知,所以你说的阳离子交换介质不挂柱结论有点草率,因为蛋白溶液中的电荷跟你缓冲液pH有很大关系。希望对你能有所启发。谢谢。你也可以考虑考虑亲和介质来纯化。

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20楼2016-11-07 08:51:58
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