24小时热门版块排行榜    

查看: 1703  |  回复: 19

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

平衡缓冲液,及上样的ph,电导要一致,另外降低上样速度,上样量试试,祝顺利。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

11楼2016-10-09 14:16:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学习有助成功

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by ljgangxs at 2016-10-08 15:54:14
看流穿量也不高,检测的酶活性高,是不是杂质组分对测活方法有干扰?造成假阳性

发酵液确实含有色素和多糖类物质,前处理已经除掉一部分了,实在没办法再除掉了,我也觉得有可能是这些杂质影响,但没办法确定

发自小木虫Android客户端
12楼2016-10-10 19:41:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学习有助成功

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by yanglin126 at 2016-10-08 16:06:56
试一试9.5
...

这么高应该用什么缓冲液?

发自小木虫Android客户端
13楼2016-10-10 19:42:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学习有助成功

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by hc-material at 2016-10-09 14:16:08
平衡缓冲液,及上样的ph,电导要一致,另外降低上样速度,上样量试试,祝顺利。

上样之前都是用超滤杯置换过缓冲液三遍,测定ph之后才上的样,而且上样量才19mg蛋白,再低就回收不了多少目标酶蛋白了~

发自小木虫Android客户端
14楼2016-10-10 19:45:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stantontang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 学习有助成功 at 2016-10-03 10:30:36
放假都没人看吗

你这梯度洗脱用什么检测器的?
15楼2016-10-11 10:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学习有助成功

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
15楼: Originally posted by stantontang at 2016-10-11 10:46:51
你这梯度洗脱用什么检测器的?...

用的AKTA Pure仪器,只有一个UV280检测器,你说的梯度洗脱检测器什么意思?这有个混合池,系统自动抽液混和的

发自小木虫Android客户端
16楼2016-10-12 12:02:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pickerwang

新虫 (初入文坛)

我们用同样的柱子分碱性磷酸酶也这样,穿透峰和梯度洗脱得好几处都有酶活。后来先上凝胶柱,再上DEAE,两次层析都只有一处能检测到酶活了。

发自小木虫IOS客户端
17楼2016-10-28 20:52:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pickerwang

新虫 (初入文坛)

原因不知道,但现象是如此,可能是成分太复杂,蛋白质间有吸附吧

发自小木虫IOS客户端
18楼2016-10-28 20:56:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学习有助成功

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
17楼: Originally posted by pickerwang at 2016-10-28 20:52:32
我们用同样的柱子分碱性磷酸酶也这样,穿透峰和梯度洗脱得好几处都有酶活。后来先上凝胶柱,再上DEAE,两次层析都只有一处能检测到酶活了。

那纯化效果怎么样?我样品直接上凝胶柱只出来一个峰,很奇怪啊

发自小木虫Android客户端
19楼2016-10-29 16:08:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家


首先纠正一下你的认识。蛋白质所带的电性跟你的缓冲液也就是平衡液的pH有绝对的关系。当pH=pI,你的蛋白在溶液中呈电中性,净电荷为0,阴阳离子交换介质都不吸附的。当pH>pI,你的蛋白呈负电荷,DEAE,Q阴离子交换介质才有用。pH<pI你的蛋白呈正电荷,阳离子交换介质CM,SP才有用。因为你的目标蛋白pI未知,所以你说的阳离子交换介质不挂柱结论有点草率,因为蛋白溶液中的电荷跟你缓冲液pH有很大关系。希望对你能有所启发。谢谢。你也可以考虑考虑亲和介质来纯化。

发自小木虫Android客户端
20楼2016-11-07 08:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学习有助成功 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 总分293求调剂 +5 加一一九 2026-03-25 7/350 2026-03-26 10:19 by 王小欠i
[考研] 化学工程085602 305分求调剂 +10 RichLi_ 2026-03-25 10/500 2026-03-26 02:17 by BruceLiu320
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求调剂 +4 李李不服输 2026-03-25 4/200 2026-03-25 21:26 by 星空星月
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 296求调剂 +4 汪!?! 2026-03-25 7/350 2026-03-25 16:41 by 汪!?!
[考研] 287求调剂 +10 晨昏线与星海 2026-03-19 11/550 2026-03-25 10:35 by userper
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 上海电力大学材料防护与新材料重点实验室招收调剂研究生(材料、化学、电化学,环境) +4 我爱学电池 2026-03-23 4/200 2026-03-25 00:59 by 1027_324
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 070300化学求调剂 +9 苑豆豆 2026-03-20 9/450 2026-03-24 17:15 by licg0208
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 工科0856求调剂 +5 沐析汀汀 2026-03-21 5/250 2026-03-23 17:56 by 海瑟薇-
[考研] 352求调剂 +3 大米饭! 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123!
[考研] 考研调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-21 3/150 2026-03-21 20:04 by 无际的草原
信息提示
请填处理意见