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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 阴离子交换层析纯化蛋白，目标酶吸附无规律，求解
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

平衡缓冲液，及上样的ph,电导要一致，另外降低上样速度，上样量试试，祝顺利。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

学习有助成功
11楼2016-10-09 14:16:08
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ljgangxs at 2016-10-08 15:54:14
看流穿量也不高，检测的酶活性高，是不是杂质组分对测活方法有干扰？造成假阳性

发酵液确实含有色素和多糖类物质，前处理已经除掉一部分了，实在没办法再除掉了，我也觉得有可能是这些杂质影响，但没办法确定

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12楼2016-10-10 19:41:36
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
10楼: Originally posted by yanglin126 at 2016-10-08 16:06:56
试一试9.5
...

这么高应该用什么缓冲液？

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13楼2016-10-10 19:42:30
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by hc-material at 2016-10-09 14:16:08
平衡缓冲液，及上样的ph,电导要一致，另外降低上样速度，上样量试试，祝顺利。

上样之前都是用超滤杯置换过缓冲液三遍，测定ph之后才上的样，而且上样量才19mg蛋白，再低就回收不了多少目标酶蛋白了～

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14楼2016-10-10 19:45:31
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stantontang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 学习有助成功 at 2016-10-03 10:30:36
放假都没人看吗

你这梯度洗脱用什么检测器的？
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15楼2016-10-11 10:46:51
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by stantontang at 2016-10-11 10:46:51
你这梯度洗脱用什么检测器的？...

用的AKTA Pure仪器，只有一个UV280检测器，你说的梯度洗脱检测器什么意思？这有个混合池，系统自动抽液混和的

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16楼2016-10-12 12:02:31
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pickerwang

新虫 (初入文坛)
我们用同样的柱子分碱性磷酸酶也这样，穿透峰和梯度洗脱得好几处都有酶活。后来先上凝胶柱，再上DEAE，两次层析都只有一处能检测到酶活了。

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17楼2016-10-28 20:52:32
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pickerwang

新虫 (初入文坛)
原因不知道，但现象是如此，可能是成分太复杂，蛋白质间有吸附吧

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18楼2016-10-28 20:56:43
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学习有助成功

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by pickerwang at 2016-10-28 20:52:32
我们用同样的柱子分碱性磷酸酶也这样，穿透峰和梯度洗脱得好几处都有酶活。后来先上凝胶柱，再上DEAE，两次层析都只有一处能检测到酶活了。

那纯化效果怎么样？我样品直接上凝胶柱只出来一个峰，很奇怪啊

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19楼2016-10-29 16:08:25
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家
首先纠正一下你的认识。蛋白质所带的电性跟你的缓冲液也就是平衡液的pH有绝对的关系。当pH＝pI，你的蛋白在溶液中呈电中性，净电荷为0，阴阳离子交换介质都不吸附的。当pH＞pI，你的蛋白呈负电荷，DEAE,Q阴离子交换介质才有用。pH＜pI你的蛋白呈正电荷，阳离子交换介质CM,SP才有用。因为你的目标蛋白pI未知，所以你说的阳离子交换介质不挂柱结论有点草率，因为蛋白溶液中的电荷跟你缓冲液pH有很大关系。希望对你能有所启发。谢谢。你也可以考虑考虑亲和介质来纯化。

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20楼2016-11-07 08:51:58
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