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阴离子交换层析纯化蛋白，目标酶吸附无规律，求解 已有2人参与
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纯化一酶，分子量和等电点未知，只能靠检测酶活来试验收集，过的是GE的DEAE-FF预装柱，平衡缓冲液用的0.01M ,pH7.4的PB缓冲液，洗脱用相同的加1M Nacl的PB，梯度洗脱，峰型如下图，结果在各个部分都检测到酶活，但大多数酶活都集中在进样时的穿透峰里，搞不明白为什么，而且经电泳检验越往后纯度是越好的，但酶活是下降的，纯化倍数下降更多，回收率更别提了，求大神帮忙解释一下怎么回事？已经试过用阳离子交换柱是不挂柱的～ @hc-material 发自小木虫Android客户端 |
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walking dead
金虫 (小有名气)
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首先纠正一下你的认识。蛋白质所带的电性跟你的缓冲液也就是平衡液的pH有绝对的关系。当pH＝pI，你的蛋白在溶液中呈电中性，净电荷为0，阴阳离子交换介质都不吸附的。当pH＞pI，你的蛋白呈负电荷，DEAE,Q阴离子交换介质才有用。pH＜pI你的蛋白呈正电荷，阳离子交换介质CM,SP才有用。因为你的目标蛋白pI未知，所以你说的阳离子交换介质不挂柱结论有点草率，因为蛋白溶液中的电荷跟你缓冲液pH有很大关系。希望对你能有所启发。谢谢。你也可以考虑考虑亲和介质来纯化。 发自小木虫Android客户端 |
20楼2016-11-07 08:51:58
2楼2016-10-03 10:30:36
yanglin126
木虫 (小有名气)
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3楼2016-10-04 08:09:52
kos900907
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4楼2016-10-07 15:31:05