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铜虫 (小有名气)

[求助] 阴离子交换层析纯化蛋白,目标酶吸附无规律,求解 已有2人参与

纯化一酶,分子量和等电点未知,只能靠检测酶活来试验收集,过的是GE的DEAE-FF预装柱,平衡缓冲液用的0.01M ,pH7.4的PB缓冲液,洗脱用相同的加1M Nacl的PB,梯度洗脱,峰型如下图,结果在各个部分都检测到酶活,但大多数酶活都集中在进样时的穿透峰里,搞不明白为什么,而且经电泳检验越往后纯度是越好的,但酶活是下降的,纯化倍数下降更多,回收率更别提了,求大神帮忙解释一下怎么回事?已经试过用阳离子交换柱是不挂柱的~

阴离子交换层析纯化蛋白,目标酶吸附无规律,求解


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铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by yanglin126 at 2016-10-04 08:09:52
说明pH还不够高

最高试过tris,pH8.5的结果差不多

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6楼2016-10-07 19:13:34
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铜虫 (小有名气)

2楼2016-10-03 10:30:36
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yanglin126

木虫 (小有名气)

3楼2016-10-04 08:09:52
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kos900907

木虫 (正式写手)

生物制药
4楼2016-10-07 15:31:05
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