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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白表达求助
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egmnmt65

金虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达求助 已有1人参与

我一直在做真核酵母表达但是蛋白跑胶的时候没有目的蛋白条带，我做激酶蛋白的表达，用的载体是PPICZB,酵母是毕赤酵母，醇氧化酶基因Aox1启动子启动外源基因的表达，诱导表达的诱导物是甲醇，诱导温度是28℃，诱导时间48-72小时，但是已经做了7-8次了没有任何的目的蛋白表达出来。我的师兄（已经毕业）曾经表达出来过一次，因为赶上了春节回家过了一个年，回来后再也表达不出来了。有一次我做预实验好像表达出来一次，但是当大量表达的时候又没有了。这次的菌种是从-80℃拿出来的，当时师兄表达出来的也是从-80℃拿出来的，不知道低温储藏菌种和蛋白表达出来之间有没有必然的联系，可惜原始菌种的最后一点被我做预实验用掉了，当时也没意识到这个问题就没有保存菌种，很后悔啊！求大神指导一下吧！

@gyesang @hc-material 发自小木虫Android客户端
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1楼 2016-10-02 23:47:17
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槑烦恼

新虫 (初入文坛)
我的情况跟你一模一样，不知道你现在解决了这个问题没有？
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7楼2018-07-02 10:08:08
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凌波水帘

铁虫 (小有名气)
再用预实验的体系诱导一次，如果成功，那很可能是大量诱导时体系氧气不足，考虑用多瓶每瓶装少量诱导。如预实验体系无法成功，考虑改变诱导温度试试

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2楼2016-10-04 22:49:48
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egmnmt65

金虫 (初入文坛)
嗯嗯，我准备先测序一次

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3楼2016-10-06 11:51:04
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
egmnmt65: 金币+30, ★★★很有帮助 2016-10-10 09:14:45
还不如重新转化一次，从头开始，保存时保存载体，重新转化，挑克隆，从头开始。小试表达，放大不表达正常，因为还要摸索放大表达的条件。
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4楼2016-10-09 14:19:59
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