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egmnmt65

金虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达求助 已有1人参与

我一直在做真核酵母表达但是蛋白跑胶的时候没有目的蛋白条带,我做激酶蛋白的表达,用的载体是PPICZB,酵母是毕赤酵母,醇氧化酶基因Aox1启动子启动外源基因的表达,诱导表达的诱导物是甲醇,诱导温度是28℃,诱导时间48-72小时,但是已经做了7-8次了没有任何的目的蛋白表达出来。我的师兄(已经毕业)曾经表达出来过一次,因为赶上了春节回家过了一个年,回来后再也表达不出来了。有一次我做预实验好像表达出来一次,但是当大量表达的时候又没有了。这次的菌种是从-80℃拿出来的,当时师兄表达出来的也是从-80℃拿出来的,不知道低温储藏菌种和蛋白表达出来之间有没有必然的联系,可惜原始菌种的最后一点被我做预实验用掉了,当时也没意识到这个问题就没有保存菌种,很后悔啊!求大神指导一下吧!

@gyesang @hc-material 发自小木虫Android客户端
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

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egmnmt65: 金币+30, ★★★很有帮助 2016-10-10 09:14:45
还不如重新转化一次,从头开始,保存时保存载体,重新转化,挑克隆,从头开始。小试表达,放大不表达正常,因为还要摸索放大表达的条件。
4楼2016-10-09 14:19:59
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凌波水帘

铁虫 (小有名气)

再用预实验的体系诱导一次,如果成功,那很可能是大量诱导时体系氧气不足,考虑用多瓶每瓶装少量诱导。如预实验体系无法成功,考虑改变诱导温度试试

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2楼2016-10-04 22:49:48
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egmnmt65

金虫 (初入文坛)

嗯嗯,我准备先测序一次

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3楼2016-10-06 11:51:04
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姜片123

新虫 (正式写手)

我也在做诱导表达~也是年前可以表达,年后回来就不能表达或表达量太少,还没找到原因~好伤心……

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5楼2018-04-06 00:51:22
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