24小时热门版块排行榜    

查看: 936  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

egmnmt65

金虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达求助 已有1人参与

我一直在做真核酵母表达但是蛋白跑胶的时候没有目的蛋白条带,我做激酶蛋白的表达,用的载体是PPICZB,酵母是毕赤酵母,醇氧化酶基因Aox1启动子启动外源基因的表达,诱导表达的诱导物是甲醇,诱导温度是28℃,诱导时间48-72小时,但是已经做了7-8次了没有任何的目的蛋白表达出来。我的师兄(已经毕业)曾经表达出来过一次,因为赶上了春节回家过了一个年,回来后再也表达不出来了。有一次我做预实验好像表达出来一次,但是当大量表达的时候又没有了。这次的菌种是从-80℃拿出来的,当时师兄表达出来的也是从-80℃拿出来的,不知道低温储藏菌种和蛋白表达出来之间有没有必然的联系,可惜原始菌种的最后一点被我做预实验用掉了,当时也没意识到这个问题就没有保存菌种,很后悔啊!求大神指导一下吧!

@gyesang @hc-material 发自小木虫Android客户端
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

姜片123

新虫 (正式写手)

我也在做诱导表达~也是年前可以表达,年后回来就不能表达或表达量太少,还没找到原因~好伤心……

发自小木虫Android客户端
5楼2018-04-06 00:51:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

凌波水帘

铁虫 (小有名气)

再用预实验的体系诱导一次,如果成功,那很可能是大量诱导时体系氧气不足,考虑用多瓶每瓶装少量诱导。如预实验体系无法成功,考虑改变诱导温度试试

发自小木虫Android客户端
2楼2016-10-04 22:49:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

egmnmt65

金虫 (初入文坛)

嗯嗯,我准备先测序一次

发自小木虫Android客户端
3楼2016-10-06 11:51:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
egmnmt65: 金币+30, ★★★很有帮助 2016-10-10 09:14:45
还不如重新转化一次,从头开始,保存时保存载体,重新转化,挑克隆,从头开始。小试表达,放大不表达正常,因为还要摸索放大表达的条件。
4楼2016-10-09 14:19:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 材料/农业专业,07/08开头均可,过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪!?!
[考研] 070300化学求调剂 +8 苑豆豆 2026-03-20 8/400 2026-03-23 20:57 by baobaoye
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 材料与化工085600,总分304,本科有两篇sci参与,求调剂 +4 幸运的酱酱 2026-03-22 5/250 2026-03-22 20:15 by edmund7
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 269专硕求调剂 +6 金恩贝 2026-03-21 6/300 2026-03-22 14:31 by ColorlessPI
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-22 6/300 2026-03-22 12:09 by 星空星月
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 求调剂,一志愿:南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕,总分289分 +4 @taotao 2026-03-19 4/200 2026-03-20 22:14 by JourneyLucky
[考研] 中南大学化学学硕337求调剂 +3 niko- 2026-03-19 6/300 2026-03-20 21:58 by luoyongfeng
[考研] 材料学求调剂 +4 Stella_Yao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 20:28 by ms629
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 材料考研调剂 +3 xwt。 2026-03-19 3/150 2026-03-19 11:22 by w沐阳w
[考研] 材料,纺织,生物(0856、0710),化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 9/450 2026-03-18 10:28 by Eember.
[考研] 考研求调剂 +3 橘颂. 2026-03-17 4/200 2026-03-17 21:43 by 有只狸奴
信息提示
请填处理意见