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18242016312

新虫 (小有名气)

[求助] 酪活力测定~福林酚法 已有1人参与

酪蛋白活力测定:采用福林酚法,以2% 酪蛋白为底物。用50 mM Tris-HCl(pH 7.5)将酶液稀释合适的倍数,取100 μl稀释好的酶液,加入同样温度的底物100 μl,恒温下反应10 min后,加入200 μl 0.4 M的三氯乙酸终止反应,在40oC下保温15 min后,10,000 rpm离心10 min,取100 μl上清液加入500 μl 0.4 M的碳酸钠,混匀后加入100 μl福林试剂,混匀后在40oC保温20 min,然后用紫外-可见吸收光谱仪测定660 nm处的吸光值。有谁知道对照组该如何处理吗?????测菌液是否有胞外表达的蛋白,用此方法,取菌液该多的转速离心?几分钟?????

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junqing

金虫 (正式写手)

对照组,添加顺序100ul酪蛋白底物+200ul三氯乙酸+100ul酶液。可参照国标蛋白酶制剂

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2楼2016-10-01 09:50:57
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wangzi4eve

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

取发酵液4000 rpm离心10min,空白对照组添加顺序为:酶液—三氯乙酸——酪蛋白
3楼2016-10-05 16:23:12
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18242016312

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by wangzi4eve at 2016-10-05 16:23:12
取发酵液4000 rpm离心10min,空白对照组添加顺序为:酶液—三氯乙酸——酪蛋白

我用的转速10000g,是不是转速过大,会把发酵液里的可溶蛋白离心下去?

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4楼2016-10-06 11:24:20
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wangzi4eve

新虫 (小有名气)

其实影响不大,转速越大离心时间越短,不过推荐转速是这个,我就按这个来的

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5楼2016-10-06 15:34:05
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18242016312

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wangzi4eve at 2016-10-06 15:34:05
其实影响不大,转速越大离心时间越短,不过推荐转速是这个,我就按这个来的

好的,多谢了!

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6楼2016-10-06 22:24:10
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