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gm729

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[交流] 求助：关于pET28表达的问题

我在设计引物时在我CDS序列和酶切位点间多引入了21bp(当时由于在CDS开始端找不到最优引物），我用的是BamH1和Xho1酶切，想用pET28表达，想问下这多出来的7个AA对我目的蛋白的纯化是否有影响？？？？？（CDS序列含有起始和终止密码）

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-26 at 18:56 ]

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1楼 2008-11-23 20:40:32

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loveedward

银虫 (小有名气)

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★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~

比天然蛋白多出来7个AA，可能对目的蛋白有影响的。不过得往后做才知道。我为了更好的纯化我的目的基因也在前面加了一个标签，对目的蛋白的活性影响很大。
还有一个问题，你把这个标签放在了5‘末端还是3’末端？若是放在5’端她还有终止密码子，翻译的时候还能翻译后面的目的基因吗？若是3‘端应该就没问题。（新手请多帮忙）