24小时热门版块排行榜    

查看: 546  |  回复: 4
当前主题已经存档。

gm729

[交流] 求助:关于pET28表达的问题

我在设计引物时在我CDS序列和酶切位点间多引入了21bp(当时由于在CDS开始端找不到最优引物),我用的是BamH1和Xho1酶切,想用pET28表达,想问下这多出来的7个AA对我目的蛋白的纯化是否有影响?????(CDS序列含有起始和终止密码)

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-26 at 18:56 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
gm729(金币+2,VIP+0):多谢建议
读码框正确就好了吧
难道你的意思是,对比正常的野生蛋白,加多了7个AAs?
不过按理来说,纯化标签对于你所克隆进去的蛋白是没有什么长度要求的,当然有蛋白性质方面的影响
2楼2008-11-23 21:13:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gm729

谢了,移码框是正确的,我就是担心前端多出的AA对体外酶活性是否有很大的影响,或是完全影响酶的结构什么的
3楼2008-11-23 21:24:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

呵呵,这个要做后续实验才知道咯,说不定不会呢~祝你好运!
4楼2008-11-23 21:43:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

loveedward

银虫 (小有名气)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
比天然蛋白多出来7个AA,可能对目的蛋白有影响的。不过得往后做才知道。我为了更好的纯化我的目的基因也在前面加了一个标签,对目的蛋白的活性影响很大。
还有一个问题,你把这个标签放在了5‘末端还是3’末端?若是放在5’端她还有终止密码子,翻译的时候还能翻译后面的目的基因吗?若是3‘端应该就没问题。(新手请多帮忙)
5楼2008-12-14 22:09:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 gm729 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿华理,数一英一285求A区调剂 +6 AZMK 2026-03-25 8/400 2026-03-26 21:22 by baoball
[考研] 求调剂 +5 芦lty 2026-03-25 6/300 2026-03-26 20:49 by 不吃魚的貓
[考研] 287求调剂 +4 land xuxu 2026-03-26 4/200 2026-03-26 19:55 by peike
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕,求调剂 +3 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:35 by 求调剂zz
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 7/350 2026-03-26 19:18 by macy2011
[考研] 291求调剂 +9 hhhhxn.. 2026-03-23 9/450 2026-03-26 18:59 by 不吃魚的貓
[考研] 调剂推荐 +4 清酒714 2026-03-26 5/250 2026-03-26 17:49 by fmesaito
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +5 kongweilin 2026-03-26 7/350 2026-03-26 14:37 by mapenggao
[考研] 求调剂 +3 QiMing7 2026-03-25 3/150 2026-03-25 21:13 by 给你你注意休息
[考研] 招08考数学 +8 laoshidan 2026-03-20 17/850 2026-03-25 17:52 by 一个红太阳
[考研] 0854人工智能方向招收调剂 +4 章小鱼567 2026-03-24 4/200 2026-03-25 13:29 by 2177681040
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 材料专硕331求调剂 +4 鲜当牛 2026-03-24 4/200 2026-03-24 15:58 by JourneyLucky
[考研] 284求调剂 +3 yanzhixue111 2026-03-23 6/300 2026-03-23 22:58 by pswait
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 生物学一志愿985,分数349求调剂 +6 zxts12 2026-03-21 9/450 2026-03-23 18:37 by macy2011
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 291求调剂 +5 孅華 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见