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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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gm729

[交流] 求助:关于pET28表达的问题

我在设计引物时在我CDS序列和酶切位点间多引入了21bp(当时由于在CDS开始端找不到最优引物),我用的是BamH1和Xho1酶切,想用pET28表达,想问下这多出来的7个AA对我目的蛋白的纯化是否有影响?????(CDS序列含有起始和终止密码)

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-26 at 18:56 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

呵呵,这个要做后续实验才知道咯,说不定不会呢~祝你好运!
4楼2008-11-23 21:43:26
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
gm729(金币+2,VIP+0):多谢建议
读码框正确就好了吧
难道你的意思是,对比正常的野生蛋白,加多了7个AAs?
不过按理来说,纯化标签对于你所克隆进去的蛋白是没有什么长度要求的,当然有蛋白性质方面的影响
2楼2008-11-23 21:13:50
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gm729

谢了,移码框是正确的,我就是担心前端多出的AA对体外酶活性是否有很大的影响,或是完全影响酶的结构什么的
3楼2008-11-23 21:24:19
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loveedward

银虫 (小有名气)


lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
比天然蛋白多出来7个AA,可能对目的蛋白有影响的。不过得往后做才知道。我为了更好的纯化我的目的基因也在前面加了一个标签,对目的蛋白的活性影响很大。
还有一个问题,你把这个标签放在了5‘末端还是3’末端?若是放在5’端她还有终止密码子,翻译的时候还能翻译后面的目的基因吗?若是3‘端应该就没问题。(新手请多帮忙)
5楼2008-12-14 22:09:57
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