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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：关于pET28表达的问题
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gm729

[交流] 求助：关于pET28表达的问题

我在设计引物时在我CDS序列和酶切位点间多引入了21bp(当时由于在CDS开始端找不到最优引物），我用的是BamH1和Xho1酶切，想用pET28表达，想问下这多出来的7个AA对我目的蛋白的纯化是否有影响？？？？？（CDS序列含有起始和终止密码）

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-26 at 18:56 ]
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1楼 2008-11-23 20:40:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
呵呵，这个要做后续实验才知道咯，说不定不会呢~祝你好运！
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4楼2008-11-23 21:43:26
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
gm729(金币+2,VIP+0):多谢建议
读码框正确就好了吧
难道你的意思是，对比正常的野生蛋白，加多了7个AAs？
不过按理来说，纯化标签对于你所克隆进去的蛋白是没有什么长度要求的，当然有蛋白性质方面的影响
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2楼2008-11-23 21:13:50
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gm729

谢了，移码框是正确的，我就是担心前端多出的AA对体外酶活性是否有很大的影响，或是完全影响酶的结构什么的
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3楼2008-11-23 21:24:19
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loveedward

银虫 (小有名气)
★
lwf991229(金币+1,VIP+0):感谢参与讨论~
比天然蛋白多出来7个AA，可能对目的蛋白有影响的。不过得往后做才知道。我为了更好的纯化我的目的基因也在前面加了一个标签，对目的蛋白的活性影响很大。
还有一个问题，你把这个标签放在了5‘末端还是3’末端？若是放在5’端她还有终止密码子，翻译的时候还能翻译后面的目的基因吗？若是3‘端应该就没问题。（新手请多帮忙）
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5楼2008-12-14 22:09:57
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