应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 真核基因在原核中的过表达酶活问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
81/1返回列表
查看: 1144  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

风雨中的微笑

铁虫 (初入文坛)

[求助] 真核基因在原核中的过表达酶活问题 已有3人参与

黑曲霉中的β-葡萄糖苷酶基因连接在质粒pet28a，导入到大肠杆菌BL21中，实现过表达，产生的β-葡萄糖苷酶用于催化制备栀子蓝色素。通过做蛋白电泳，确认此蛋白已经实现了过表达，超声破碎取其上清测酶活，加NaCO3终止反应时不显黄色，两天以后才开始显黄色，用一步法制备栀子蓝时，颜色呈绿色或黄色。是因为酶活很低吗？显黄色的过程怎么滞后了呢？也是由于酶活吗？用原核载体表达真核基因时本身就存在各种问题，怎么改进才能正确表达？求各位大神指教，不胜感激~~~
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-09-27 10:46:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄小萌萌

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:25:20
酶活不够，可以加分子伴侣试试
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-09-27 10:48:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

迷路人啊

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:25:27
密码子优化一下

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
3楼2016-09-27 11:00:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

werq63

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:25:38
xn8008: 应助指数+1 2016-11-06 21:26:30
蛋白表达出来，就不用密码子优化了吧，不过酶的条件需要很多因素都较好的时候才能使其活性最好。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2016-09-27 12:28:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄小萌萌

银虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:26:15
顶一下
5楼2016-09-27 15:38:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风雨中的微笑

铁虫 (初入文坛)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:26:35
引用回帖:
4楼: Originally posted by werq63 at 2016-09-27 12:28:39
蛋白表达出来，就不用密码子优化了吧，不过酶的条件需要很多因素都较好的时候才能使其活性最好。

嗯，密码子优化是在之前做的，已经优化好了的，试了温度、IPTG浓度等各种因素，酶活的延迟现象是不是跟酶本身有关系？有做过β-葡萄糖苷酶过表达的吗？
赞一下 回复此楼
6楼2016-09-28 09:26:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风雨中的微笑

铁虫 (初入文坛)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:27:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by 黄小萌萌 at 2016-09-27 15:38:25
顶一下

7楼2016-09-28 09:27:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:27:15
xn8008: 应助指数+1 2016-11-06 21:27:21
β-葡萄糖苷酶在酿酒酵母表达活性可以，可以试试

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-11-06 18:24:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 风雨中的微笑 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 280求调剂 +8 咕噜晓晓 2026-04-02 9/450 2026-04-02 16:52 by 1939136013狗壮
[考研] 一志愿同济大学323分（080500）求调剂 +6 yikeniu 2026-04-01 6/300 2026-04-02 14:19 by smileboy2006
[考研] 283求调剂 +3 jiouuu 2026-04-02 4/200 2026-04-02 14:08 by 哒哒哒呱呱呱
[考研] 290求调剂 +3 1314捧花 2026-04-02 3/150 2026-04-02 13:34 by Ecowxq666！
[考研] 327求调剂 +9 汲亦昊 2026-03-29 9/450 2026-04-02 11:44 by 运气yunqi
[考研] 0856材料与化工调剂，339 +13 10213207 2026-03-31 13/650 2026-04-02 11:35 by michael2011
[考研] 265求调剂11408 +4 刘小鹿lu 2026-03-27 4/200 2026-04-02 11:27 by guyan1000
[考研] 一志愿南师大0703化学 275求调剂 +6 Ripcord上岸 2026-03-27 6/300 2026-04-02 11:19 by TTTpp
[考研] 303分 0807学硕求调剂 +3 TYC3632 2026-04-01 3/150 2026-04-01 19:24 by lwk2004
[考研] 324求调剂 +10 hanamiko 2026-03-26 12/600 2026-04-01 16:59 by oooqiao
[考研] 一志愿中国科学院大学265求调剂 +8 恬淡ye 2026-03-31 9/450 2026-04-01 14:34 by 逆水乘风
[考研] 材料与化工调剂一志愿大连海事085600，349 +9 吃的不少 2026-03-30 9/450 2026-04-01 11:24 by wangjy2002
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +18 zhubinhao 2026-03-27 18/900 2026-04-01 09:37 by oooqiao
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考博] 材料专业申博 +5 杜雨婷dyt 2026-03-29 5/250 2026-03-31 11:19 by oooqiao
[考研] 福建理工大学材料学院先进合金团队招收考研调剂学生 +3 大华金商都 2026-03-30 4/200 2026-03-31 01:04 by 方英俊602
[考研] 327求调剂 +5 小卡不卡. 2026-03-29 5/250 2026-03-30 19:30 by Wang200018
[考研] 291求调剂 +5 Y-cap 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:18 by mumin1990
[考研] 本科双非材料，跨考一志愿华电085801电气，283求调剂，任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:16 by 松花缸1201
[考研] 一志愿吉大071010，316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭