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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 真核基因在原核中的过表达酶活问题
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风雨中的微笑

铁虫 (初入文坛)

[求助] 真核基因在原核中的过表达酶活问题 已有3人参与

黑曲霉中的β-葡萄糖苷酶基因连接在质粒pet28a，导入到大肠杆菌BL21中，实现过表达，产生的β-葡萄糖苷酶用于催化制备栀子蓝色素。通过做蛋白电泳，确认此蛋白已经实现了过表达，超声破碎取其上清测酶活，加NaCO3终止反应时不显黄色，两天以后才开始显黄色，用一步法制备栀子蓝时，颜色呈绿色或黄色。是因为酶活很低吗？显黄色的过程怎么滞后了呢？也是由于酶活吗？用原核载体表达真核基因时本身就存在各种问题，怎么改进才能正确表达？求各位大神指教，不胜感激~~~
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1楼 2016-09-27 10:46:37
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:25:20
酶活不够，可以加分子伴侣试试
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2楼2016-09-27 10:48:08
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迷路人啊

新虫 (小有名气)
★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:25:27
密码子优化一下

发自小木虫IOS客户端
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3楼2016-09-27 11:00:24
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werq63

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:25:38
xn8008: 应助指数+1 2016-11-06 21:26:30
蛋白表达出来，就不用密码子优化了吧，不过酶的条件需要很多因素都较好的时候才能使其活性最好。
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4楼2016-09-27 12:28:39
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黄小萌萌

银虫 (小有名气)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:26:15
顶一下
5楼2016-09-27 15:38:25
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风雨中的微笑

铁虫 (初入文坛)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:26:35
引用回帖:
4楼: Originally posted by werq63 at 2016-09-27 12:28:39
蛋白表达出来，就不用密码子优化了吧，不过酶的条件需要很多因素都较好的时候才能使其活性最好。

嗯，密码子优化是在之前做的，已经优化好了的，试了温度、IPTG浓度等各种因素，酶活的延迟现象是不是跟酶本身有关系？有做过β-葡萄糖苷酶过表达的吗？
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6楼2016-09-28 09:26:37
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风雨中的微笑

铁虫 (初入文坛)
xn8008: 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:27:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by 黄小萌萌 at 2016-09-27 15:38:25
顶一下

7楼2016-09-28 09:27:59
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梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
xn8008: 金币+1, 欢迎发帖交流 2016-11-06 21:27:15
xn8008: 应助指数+1 2016-11-06 21:27:21
β-葡萄糖苷酶在酿酒酵母表达活性可以，可以试试

发自小木虫Android客户端
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8楼2016-11-06 18:24:25
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