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fzhrobin木虫 (正式写手)
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[交流]
植物蛋白裂解液65mM DTT
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本人在实验中遇到了个问题，请教下各位专家： 植物蛋白已经用TCA/丙酮法提取到了。下面要进行酶解，酶解之后上质谱。参考别人的文献，在酶解前在提取到的200ug粗蛋白中加入200ul裂解液（8M urea/4%CHAPS/40mM Tris/65mM DTT），震荡混匀后，又加入2ul的1M DTT（使其终浓度为10mM，这个浓度似乎是必须的）。 问题来了，我的裂解液成分中加入65mM DTT对不对？貌似再加2ul1M DTT浓度不会是10mM啊？反而是裂解液中不加65mM DTT的话，最终浓度是对的。 到底问题出在哪里呢？有没有必要加入两次DTT？如果必须加的话，两步的作用有什么不同？ “200ug粗蛋白中加入200ul裂解液”这步该如何操作？还是志200ul裂解液中含200ug粗蛋白？ 请高手指教，谢谢！ |
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2楼2016-09-26 10:02:46
pandezhuo
银虫 (著名写手)
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裂解液中DTT是使用时才加的，所以一般做法，除了DTT外裂解液配好后分装成500ul左右的小管，—20度保存，DTT配成1M或4M后也分装成20ul左右的小管，—20度保存。待使用时，除了DTT外的裂解液和DTT同时取出，溶解后，根据裂解液所需的DTT的浓度加入一定量的DTT. 发自小木虫Android客户端 |
3楼2016-09-29 10:36:21
4楼2018-01-02 20:55:49
