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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关大肠杆菌的表达量低的问题
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speculiar

银虫 (小有名气)

[交流] 有关大肠杆菌的表达量低的问题

我在做一个酶的表达，能测出酶活，但是跑蛋白胶看不到目的条带，换了两次宿主都是这样。我用的是T7启动子，照理说表达量应该非常高才对。请问是怎么回事啊？
是不是因为存在稀有密码子呢？
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1楼 2008-11-23 09:44:56
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翱天

新虫 (初入文坛)
加点表达诱导剂试试？
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路过。。。
2楼2008-11-23 11:06:57
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speculiar

银虫 (小有名气)
我的IPTG浓度一般都控制在1mM，应该足够了吧。
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3楼2008-11-23 11:52:56
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liumikewolf

金虫 (小有名气)
是不是菌株老化? 划线挑单菌落试一下吧
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4楼2008-11-26 08:45:17
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humants

金虫 (正式写手)
既然有酶活，就说明与稀有密码子关系不大了，若是稀有密码子原因，他表达出的蛋白就是不完整的，不可能有活性。

试着改一下发酵条件，做个正交试验。
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5楼2008-11-26 09:14:56
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speculiar

银虫 (小有名气)
菌株老化的问题应该不存在，因为我每次都是挑单菌落培养的。
楼上同志提的优化发酵条件可以考虑~~请问除了IPTG浓度、诱导时间、诱导温度外还有什么因素需要考虑呢？
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6楼2008-11-29 00:00:18
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cooldog520

铜虫 (初入文坛)
还有诱导剂浓度，还有装液量
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7楼2008-12-02 01:30:43
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