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cy6483289

新虫 (初入文坛)

[交流] Sf9蛋白表达遇到的很郁闷的问题，求大神们过来指导一下， 好累，做了4个月了！！ 已有1人参与

本人小白，想用昆虫细胞表达我的蛋白，质粒Pfast-dual。蛋白为PRRSV的N蛋白（123aa）。胞内表达，通过冻融法获取胞内蛋白，拯救出了P1代和P2代毒，（病毒放在4度中保存）。前面的结果还算可以，但是做到P3代毒的时候，蛋白出现了弥散的情况，相同条件下蛋白好像越来越少。求大神指导下
具体关键步骤

接毒6孔板，每个孔50ul。

培养时间6天（不区分代次）。
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1楼 2016-09-24 14:48:00
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cy6483289

新虫 (初入文坛)
第三代毒结果 样品顺序 p3-1 p3-1 p3-2 p3-2 maker 超声上清，阳性对照，阴性对照。 目的蛋白是最下方的蛋白。
Sf9蛋白表达遇到的很郁闷的问题，求大神们过来指导一下， 好累，做了4个月了！！
2016-9-23-N.jpg
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4楼2016-09-24 14:56:10
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cy6483289

新虫 (初入文坛)
附上结果图
Sf9蛋白表达遇到的很郁闷的问题，求大神们过来指导一下， 好累，做了4个月了！！-1
p1代毒WB结果，抗体会单抗
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2楼2016-09-24 14:49:30
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cy6483289

新虫 (初入文坛)
第二代毒结果。分别是p2-1,p2-2,上清，marker 阳性对照，阴性对照
Sf9蛋白表达遇到的很郁闷的问题，求大神们过来指导一下， 好累，做了4个月了！！-2
2016-9-5-N-p2-1.jpg
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3楼2016-09-24 14:51:43
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cy6483289

新虫 (初入文坛)
目的蛋白15kd。有磷酸化，会形成多聚体结构。用的抗体是单抗，有His标签，His单抗做出来的结果也是差不多的，不上图了。求大神指导，求大神！！！
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5楼2016-09-24 14:59:09
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