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cy6483289

新虫 (初入文坛)

[交流] Sf9蛋白表达遇到的很郁闷的问题,求大神们过来指导一下, 好累,做了4个月了!! 已有1人参与

本人小白,想用昆虫细胞表达我的蛋白,质粒Pfast-dual。蛋白为PRRSV的N蛋白(123aa)。胞内表达,通过冻融法获取胞内蛋白,拯救出了P1代和P2代毒,(病毒放在4度中保存)。前面的结果还算可以,但是做到P3代毒的时候,蛋白出现了弥散的情况,相同条件下蛋白好像越来越少。求大神指导下
具体关键步骤

接毒6孔板,每个孔50ul。

培养时间6天(不区分代次)。
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cy6483289

新虫 (初入文坛)

第二代毒结果。分别是p2-1,p2-2,上清,marker 阳性对照,阴性对照
Sf9蛋白表达遇到的很郁闷的问题,求大神们过来指导一下, 好累,做了4个月了!!
2016-9-5-N-p2-1.jpg

3楼2016-09-24 14:51:43
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cy6483289

新虫 (初入文坛)

附上结果图
Sf9蛋白表达遇到的很郁闷的问题,求大神们过来指导一下, 好累,做了4个月了!!-1
p1代毒WB结果,抗体会单抗

2楼2016-09-24 14:49:30
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cy6483289

新虫 (初入文坛)

第三代毒结果 样品顺序 p3-1 p3-1 p3-2 p3-2 maker 超声上清,阳性对照,阴性对照。 目的蛋白是最下方的蛋白。
Sf9蛋白表达遇到的很郁闷的问题,求大神们过来指导一下, 好累,做了4个月了!!-2
2016-9-23-N.jpg

4楼2016-09-24 14:56:10
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cy6483289

新虫 (初入文坛)

目的蛋白15kd。有磷酸化,会形成多聚体结构。用的抗体是单抗,有His标签,His单抗做出来的结果也是差不多的,不上图了。求大神指导,求大神!!!
5楼2016-09-24 14:59:09
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