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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 求问各位SSR和PAGE电泳以及相关PCR反应的一些问题！！~么么哒
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没错我有ID

新虫 (初入文坛)

[交流] 求问各位SSR和PAGE电泳以及相关PCR反应的一些问题！！~么么哒 已有8人参与

本人在做SSR和遗传 多样性的实验，这是8%的非变性page，电压170V跑的。之后银染色
有很多影子条带导致不能区分目的条带（最后是2000BP的marker虽然太大将就着用了），求问各位如何优化pcr条件能够去除影子带。
ddH2O                       17
rtaq                            0.3
buffer（mg2+ free）  2.5
dNTP                          1.2
MgCl2                         1
F                                1
R                                1
基因组                        1

求问各位SSR和PAGE电泳以及相关PCR反应的一些问题！！~么么哒
IMG_2191.JPG
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1楼 2016-09-24 08:34:24
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star013

新虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
还可以吧，我们公司可以提供该技术服务

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2楼2016-09-25 09:00:06
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没错我有ID

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by star013 at 2016-09-25 09:00:06
还可以吧，我们公司可以提供该技术服务

目的带应该是2.300BP的，我这个都分不出目的条带了啊……
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3楼2016-09-25 11:58:55
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star013

新虫 (知名作家)
跟胶有关

发自小木虫Android客户端
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4楼2016-09-25 12:13:28
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memorize1991

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我本科毕业论文也做的SSR分子鉴定，植物的。也是25ul体系的，非变性和变性差不多。我用的6%的胶，1400V，设定的70mA，大概1.5h跑完。看你的应该也做的64孔或者96孔的吧，个人观点，1，你的体系中DNA量有点大，我不知道你到底有多少ng的DNA，这个也不能确定你加多了。2，你的胶都黄成这样了，还有条带都黑成这个样，染色是一定过度了。我记得我好像是千分之二的硝酸银，初次配的染色2到3分钟就可以显色，用过3到4次后，5分钟左右显色。

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5楼2016-09-25 15:27:35
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土豆君

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做毛细管电泳检测得了
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爱基百客，提供专业级ChIP-seq、ATAC-seq、MeRIP-seq、RIP-seq等表观技术服务
6楼2016-09-25 15:32:35
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没错我有ID

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by memorize1991 at 2016-09-25 15:27:35
我本科毕业论文也做的SSR分子鉴定，植物的。也是25ul体系的，非变性和变性差不多。我用的6%的胶，1400V，设定的70mA，大概1.5h跑完。看你的应该也做的64孔或者96孔的吧，个人观点，1，你的体系中DNA量有点大，我不知 ...

谢谢谢谢！！！！      1。    我之后检测下DNA浓度      2。    然后我是用的千分之一的硝酸银染色的，每次都是现配现用，基本都是染色8~10分钟然后10S去离子水里清洗再在含有6gNaOH和4ml甲醛的400ml显色液里面显色的！           可以加个QQ方便询问吗真的太感谢啦
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7楼2016-09-25 22:27:20
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没错我有ID

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 土豆君 at 2016-09-25 15:32:35
做毛细管电泳检测得了

一开始说要用银染法跑PAGE导师同意了，现在再说不太好吧我只是一个小小的本科生QAQ
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8楼2016-09-25 22:32:10
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土豆君

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by 没错我有ID at 2016-09-25 22:32:10
一开始说要用银染法跑PAGE导师同意了，现在再说不太好吧我只是一个小小的本科生QAQ...

本来PAGE胶的精密性就不太好，然后你再说PAGE胶有毒，要保证安全，换一个

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爱基百客，提供专业级ChIP-seq、ATAC-seq、MeRIP-seq、RIP-seq等表观技术服务
9楼2016-09-25 23:35:55
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liugs

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
10楼2016-09-26 10:21:41
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